【正文】 菌制劑生產(chǎn)的無(wú)菌輔料（如鹽酸精氨酸、碳酸氫鈉等）的無(wú)菌工藝驗(yàn)證也可以參考本指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。與無(wú)菌制劑工藝相比，無(wú)菌原料藥的生產(chǎn)工藝一般要更復(fù)雜，設(shè)備類型多種多樣，且不同的工藝有不同的特點(diǎn)。工藝過(guò)程中的物料、內(nèi)包裝材料、設(shè)備（包括閥門(mén)、管道等相關(guān)部件）的滅菌和無(wú)菌傳遞、對(duì)接、組裝等操作相比無(wú)菌制劑要復(fù)雜的多。原料藥從非無(wú)菌轉(zhuǎn)化成無(wú)菌狀態(tài)的常用方法是通過(guò)除菌過(guò)濾來(lái)實(shí)現(xiàn)。該過(guò)程受料液性質(zhì)影響很大，需要根據(jù)料液的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾器及濾芯的材質(zhì)。另外，原料藥的生產(chǎn)設(shè)備通常體積較大且內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在選擇放置位置或進(jìn)行投料、取樣、回收操作時(shí)應(yīng)考慮如何保證潔凈區(qū)內(nèi)的氣流流向符合要求，以及如何匹配好高效過(guò)濾器的位置與設(shè)備本體之間的位置分布等。盡管無(wú)菌制劑和無(wú)菌原料藥在生產(chǎn)過(guò)程和質(zhì)量控制特點(diǎn)上存在諸多不同，但就無(wú)菌保證的基本原則，以及生產(chǎn)管理和驗(yàn)證的基本原則而言，兩者的要求又是相通的。因此在生產(chǎn)設(shè)備、廠房設(shè)施、潔凈級(jí)別及監(jiān)測(cè)、滅菌工藝與方法及質(zhì)量控制要求等方面，無(wú)菌原料藥和無(wú)菌制劑的要求可以相互參考。無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝特點(diǎn)無(wú)菌原料藥可以通過(guò)最終滅菌或非最終滅菌的方式獲得。對(duì)于采用最終滅菌的無(wú)菌原料藥，必須嚴(yán)格控制微生物污染、細(xì)菌內(nèi)毒素和不溶性微粒的水平。由于多數(shù)原料藥的耐熱性較差，所以通常無(wú)菌原料藥采用非終端滅菌的方式生產(chǎn)。無(wú)菌原料的精制過(guò)程和除菌過(guò)程經(jīng)常結(jié)合在一起，作為生產(chǎn)工藝的一個(gè)單元操作來(lái)完成。目前生產(chǎn)上最常用的方法是無(wú)菌過(guò)濾法；即將非無(wú)菌的中間體或原材料配制成溶液。無(wú)菌原料藥常用工藝包括溶媒結(jié)晶和冷凍干燥兩種，前期國(guó)內(nèi)也有采用噴霧干燥工藝的無(wú)菌原料藥，但是多因?yàn)槠渖a(chǎn)工藝不能滿足無(wú)菌工藝的驗(yàn)證要求而逐漸被放棄或進(jìn)行了工藝變更。無(wú)菌過(guò)濾溶媒結(jié)晶工藝和冷凍干燥工藝涉及的具體設(shè)備和操作各不相同，但都采用除菌過(guò)濾的方式使料液從非無(wú)菌狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)菌狀態(tài)，并且要在此后的干燥、粉碎、混合以及分裝過(guò)程中始終保持無(wú)菌狀態(tài)。溶媒結(jié)晶工藝典型的溶媒結(jié)晶工藝流程包括非無(wú)菌原料藥的溶解、除菌過(guò)濾、結(jié)晶、固液分離（如常用過(guò)濾、離心等方法）、洗滌、干燥、粉碎、混合、分裝等過(guò)程。溶解環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注物料的微生物負(fù)荷、溶劑的質(zhì)量、設(shè)備的微生物污染水平以及使用的料液輸送動(dòng)力源（如空氣或氮?dú)猓┑奈⑸镂廴舅?。除菌過(guò)濾環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注濾器本身的無(wú)菌性、過(guò)濾器與料液的相容性、濾芯本身及裝配后的完整性、過(guò)濾器的清洗及滅菌周期、過(guò)濾器的除菌效率、除菌濾器前料液的微生物污染水平等。結(jié)晶環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性及密封裝置的可靠性、設(shè)備的清洗及滅菌周期、呼吸器的完整性及無(wú)菌性；如需加入晶種，晶種本身應(yīng)符合無(wú)菌藥品的要求，并且應(yīng)驗(yàn)證晶種加入過(guò)程的無(wú)菌保證。過(guò)濾或離心環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器的完整性及無(wú)菌性等。洗滌環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注洗滌溶劑的無(wú)菌性。干燥環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注干燥設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器的完整性及無(wú)菌性，以及真空系統(tǒng)的防倒吸設(shè)置（如使用真空，應(yīng)在管路上安裝除菌級(jí)別的過(guò)濾器）。粉碎環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置的可靠性；粉碎用氣體（如使用氣流粉碎機(jī)）的無(wú)菌保證、給料方式的無(wú)菌保證水平等?；旌檄h(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期等。分裝環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注分裝設(shè)備本身的無(wú)菌性或者其產(chǎn)品暴露潔凈級(jí)別是否達(dá)到A級(jí)區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)注內(nèi)包裝材料的無(wú)菌性、內(nèi)包裝材料的遞入方式、內(nèi)包裝容器的密封性以及取樣環(huán)節(jié)的無(wú)菌保證。冷凍干燥工藝凍干無(wú)菌原料藥的典型流程包括原料藥的溶解、除菌過(guò)濾、冷凍干燥、粉碎、混合和分裝。其中除冷凍干燥環(huán)節(jié)外，其它工藝步驟的關(guān)注重點(diǎn)可參考溶媒結(jié)晶工藝的相關(guān)要求。凍干工藝環(huán)節(jié)中應(yīng)關(guān)注的主要問(wèn)題包括凍干機(jī)本身及附屬裝置的無(wú)菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期、設(shè)備的可清洗及可滅菌性；真空系統(tǒng)的保證及干燥后的壓力平衡，補(bǔ)氣過(guò)程的無(wú)菌保證（宜補(bǔ)充無(wú)菌氣體或者在凍干機(jī)上安裝除菌呼吸過(guò)濾器），以及物料進(jìn)出設(shè)備時(shí)的無(wú)菌保證。無(wú)菌原料藥工藝驗(yàn)證采用終端滅菌工藝的無(wú)菌原料藥工藝驗(yàn)證可參考制劑終端滅菌工藝驗(yàn)證的相關(guān)要求。非終端滅菌的無(wú)菌原料藥工藝驗(yàn)證主要包括培養(yǎng)基模擬灌裝驗(yàn)證和過(guò)濾除菌系統(tǒng)驗(yàn)證。其中的過(guò)濾除菌系統(tǒng)驗(yàn)證可參考無(wú)菌制劑的相關(guān)要求，并重點(diǎn)關(guān)注進(jìn)入結(jié)晶罐的所有物料（如原料藥、溶媒、酸堿、氣體等）均應(yīng)除菌過(guò)濾，并進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證。驗(yàn)證批量常規(guī)生產(chǎn)批量較小的無(wú)菌原料藥，應(yīng)最大限度模擬大生產(chǎn)的批量。對(duì)于常規(guī)生產(chǎn)批量較大的無(wú)菌原料藥，考慮到模擬大生產(chǎn)批量的可行性和實(shí)際介質(zhì)培養(yǎng)的可行性，模擬灌裝批量可以比大生產(chǎn)批量小，但模擬介質(zhì)應(yīng)能夠接觸到所有產(chǎn)品可能接觸的設(shè)備內(nèi)表面。并能夠充分模擬實(shí)際生產(chǎn)可能遇到的其它各種最差條件。最差條件選擇最差條件時(shí)，應(yīng)考慮進(jìn)出人數(shù)（包括維修人員）、生產(chǎn)材料、設(shè)備設(shè)施在無(wú)菌區(qū)的暴露時(shí)間、設(shè)備滅菌后至開(kāi)始灌裝前的間隔時(shí)間，以及微生物抑制因素（如溫度、氮保護(hù)、抗生素）的調(diào)整和消除等。應(yīng)確認(rèn)模擬介質(zhì)是否能接觸到實(shí)際生產(chǎn)工藝過(guò)程中所有無(wú)菌產(chǎn)品可能接觸到的表面，時(shí)間間隔是否具有可比性（比如溶解過(guò)濾時(shí)間應(yīng)不短于實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中使用的時(shí)間），可將時(shí)間延長(zhǎng)來(lái)模擬最差條件，如果縮短時(shí)間來(lái)模擬，需要說(shuō)明/論證是否縮短時(shí)間后的條件可等同于生產(chǎn)工藝的最差條件。其它要求可參考無(wú)菌制劑的驗(yàn)證相關(guān)內(nèi)容。附件1：滅菌工藝選擇的決策樹(shù)溶液劑型產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹(shù)附件2：D值的測(cè)定方法一般可以采用毛細(xì)管暴熱計(jì)時(shí)法測(cè)定污染微生物的耐熱參數(shù)D值，測(cè)定主要包括以下幾個(gè)步驟：①制樣：將產(chǎn)品中的微生物分離，將菌膜或者孢子懸浮液分別放入注射用水或者磷酸鹽緩沖液中，采用適宜的設(shè)備振動(dòng)使其分散均勻，制備成濃度約為108個(gè)/ml的懸浮液，然后在沸水中加熱約10分鐘以殺滅可能存在的芽孢繁殖體。②測(cè)定：將上述懸浮液注入適宜長(zhǎng)度的毛細(xì)管中，使每管的菌量為106個(gè)孢子，封口，置于校正過(guò)的121℃的油浴中曝?zé)帷Ｃ扛?3分鐘取出兩支毛細(xì)管并迅速冷卻，制備孢子溶液，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。③計(jì)算：根據(jù)公式lgNt=lgN0t/D，其中，N0和Nt分別為零時(shí)和曝?zé)醫(yī)時(shí)間的孢子的濃度。由以上的D值的測(cè)定方法可知，測(cè)定所需的儀器并不非常復(fù)雜，但需要專業(yè)技術(shù)人員和經(jīng)驗(yàn)的積累。在不具備D值測(cè)定條件時(shí)，可以采用測(cè)定污染菌的耐熱性來(lái)代替。附件3：生物指示劑用量的確定方法。①陰性分?jǐn)?shù)法根據(jù)公式：F0=Lt，其中L為滅菌溫度的滅菌率（Z=10），t為滅菌時(shí)間。SLR=FO/Dbi，其中SLR為sporelogreduction，即孢子對(duì)數(shù)下降值，Dbi為所選用的生物指示劑的D值。SLR=lgNOlgNt，其中NO為滅菌前容器內(nèi)初始孢子數(shù)，Nt為滅菌后容器內(nèi)殘存孢子數(shù)。lgNt=lg(n/q)，其中n為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)瓶樣品總數(shù)，q為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)結(jié)果為陰性的瓶數(shù))可以得到：lgNO=lgNt+SLR=lg(n/q)+FO/Dbi=lg(n/q)+Lt/Dbi當(dāng)濕熱滅菌工藝的滅菌溫度和滅菌時(shí)間確定后，L、t可以確定；生物指示劑確定后，Dbi可以確定；微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)方案確定后，n、q可以確定。所以，通過(guò)以上的幾個(gè)公式，可以計(jì)算出生物指示劑的用量，即NO。需要說(shuō)明的是，在常規(guī)的生產(chǎn)條件下，如采用115℃滅菌30分鐘，假定采用的生物指示劑的D值為1，那么，計(jì)算得到的生物指示劑的用量為106，這也是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)時(shí)常規(guī)采用的用量。②殘存曲線法根據(jù)公式：FT/Dbi=lgNO+1，其中FT為T(mén)滅菌值，即給定Z（Z=10）值下，滅菌程序在溫度T下的等效滅菌時(shí)間，F(xiàn)T=F0/L；Dbi為所選用的生物指示劑的D值；NO為滅菌前容器內(nèi)初始孢子數(shù)。當(dāng)濕熱滅菌工藝的滅菌溫度確定后，L可以確定；生物指示劑確定后，Dbi可以確定；當(dāng)F0設(shè)定后，即可計(jì)算出生物指示劑的用量，即NO。