【正文】 無菌工藝驗證指導原則1 概述無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，一般包括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。從嚴格意義上講，無菌藥品應完全不含有任何活的微生物，但由于目前檢驗手段的局限性，絕對無菌的概念不能適用于對整批產(chǎn)品的無菌性評價，因此目前所使用的“無菌”概念，是概率意義上的“無菌”。一批藥品的無菌特性只能通過該批藥品中活微生物存在的概率低至某個可接受的水平，即無菌保證水平（SterilityAssuranceLevel,SAL）來表征。而這種概率意義上的無菌保證取決于合理且經(jīng)過驗證的滅菌工藝過程、良好的無菌保證體系以及生產(chǎn)過程中嚴格的GMP管理。無菌藥品通常的滅菌方式可分為：1）濕熱滅菌；2）干熱滅菌；3）輻射滅菌；4）氣體滅菌；5）除菌過濾。按工藝的不同分為最終滅菌工藝（sterilizingprocess）和無菌生產(chǎn)工藝（asepticprocessing）。其中最終滅菌工藝系指將完成最終密封的產(chǎn)品進行適當滅菌的工藝，由此生產(chǎn)的無菌制劑稱為最終滅菌無菌藥品，濕熱滅菌和輻射滅菌均屬于此范疇。無菌生產(chǎn)工藝系指在無菌環(huán)境條件下，通過無菌操作來生產(chǎn)無菌藥品的方法，除菌過濾和無菌生產(chǎn)均屬于無菌生產(chǎn)工藝。部分或全部工序采用無菌生產(chǎn)工藝的藥品稱為非最終滅菌無菌藥品?；跓o菌藥品滅菌/除菌生產(chǎn)工藝的現(xiàn)狀，本指導原則主要對在注射劑與無菌原料藥的生產(chǎn)中比較常用的濕熱滅菌與無菌生產(chǎn)工藝進行討論。本指導原則中的濕熱滅菌工藝驗證主要包括滅菌條件的篩選和研究，濕熱滅菌的物理確認，生物指示劑確認等內(nèi)容；無菌生產(chǎn)工藝驗證主要包括無菌分裝、除菌過濾、培養(yǎng)基模擬灌裝、過濾系統(tǒng)的驗證等驗證內(nèi)容。最終滅菌工藝和無菌生產(chǎn)工藝實現(xiàn)產(chǎn)品無菌的方法有本質(zhì)上的差異，從而決定了由這兩類工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品應該達到的最低無菌保證水平的巨大差異。最終滅菌無菌產(chǎn)品的無菌保證水平為殘存微生物污染概率≤106，非最終滅菌無菌產(chǎn)品的無菌保證水平至少應達到95%置信限下的污染概率%。由此可見，非最終滅菌無菌產(chǎn)品存在微生物污染的概率遠遠高于最終滅菌無菌產(chǎn)品，為盡量減少非最終滅菌無菌產(chǎn)品污染微生物的概率，鼓勵企業(yè)在生產(chǎn)中采用隔離艙等先進技術設備?；谫|(zhì)量源于設計的藥品研發(fā)與質(zhì)量控制的理念，為保證無菌藥品的無菌保證水平符合要求，研發(fā)者在產(chǎn)品的研發(fā)過程中應根據(jù)藥品的特性選擇合適的滅菌方式，并系統(tǒng)地評估生產(chǎn)的各環(huán)節(jié)及各種因素對無菌保證水平的影響，根據(jù)風險的高低與風險發(fā)生的可能性等來針對性地驗證滅菌工藝的可靠性，驗證的內(nèi)容、范圍與批數(shù)等取決于工藝與產(chǎn)品的復雜性以及生產(chǎn)企業(yè)對類似工藝的經(jīng)驗多少等因素。只有在研發(fā)中經(jīng)過系統(tǒng)而深入的研究與驗證，獲得可靠的滅菌工藝，并在日常的生產(chǎn)過程中嚴格執(zhí)行該工藝，才能真正保證每批藥品的無菌保證水平符合預期的要求。當然，在藥品的整個生命周期內(nèi)，隨著對所生產(chǎn)的藥品的特性和生產(chǎn)工藝等的了解越來越全面和深入，滅菌工藝也在不斷的完善，此時就會涉及到對變更后的工藝如何進行驗證的問題，本指導原則也適用于此種情況。由于滅菌/除菌工藝驗證的工作在我國開展的時間不長，基礎還不牢靠，因此必然在實際工作中會遇到很多難以預料的問題，故本指導原則只是一個一般性原則，藥物研發(fā)者應從藥物研發(fā)的客觀規(guī)律出發(fā)，具體問題具體分析，必要時根據(jù)實際情況采用其他有效的方法和手段。同時，本指導原則作為階段性產(chǎn)物，必將隨著藥物研究者與評價者對滅菌工藝研究與驗證的認知加深，而不斷進行修訂與完善。2制劑濕熱滅菌工藝濕熱滅菌工藝的確定依據(jù)滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝的決策樹（詳見附件1）進行，濕熱滅菌工藝是決策樹中首先考慮的滅菌工藝。濕熱滅菌法是利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。高溫在殺滅微生物的同時，可能對藥品的質(zhì)量也有所影響。如果產(chǎn)品不能耐受濕熱滅菌，則需要考慮采用無菌生產(chǎn)工藝。所以，對于藥品的滅菌工藝的考察和確定，首先是考察其能否采用濕熱滅菌工藝，能否耐受濕熱滅菌的高溫。目前濕熱滅菌方法主要有兩種：過度殺滅法（F0≥12）和殘存概率法（8≤F012）。用其它F0值小于8的終端滅菌條件的工藝，則應該按照無菌生產(chǎn)工藝要求。以上兩種濕熱滅菌方法都可以在實際生產(chǎn)中使用，具體選擇哪種滅菌方法，在很大程度上取決于被滅菌產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性。藥物是否能耐受濕熱滅菌工藝的高溫，除了與藥物活性成分的化學性質(zhì)相關外，還與活性成分存在的環(huán)境密切相關，所以在初期的工藝設計過程中需要通過對藥物熱穩(wěn)定性進行綜合分析，以確定能否采用濕熱滅菌工藝。通過對活性成分的化學結構進行分析，可以初步判斷活性成分的穩(wěn)定性，如果活性成分結構中含有一些對熱不穩(wěn)定的結構基團，則提示主成分的熱穩(wěn)定性可能較差。在此基礎之上，還應該通過設計一系列的強制降解試驗對活性成分的穩(wěn)定性做進一步研究確認，了解活性成分在各種條件下可能發(fā)生的降解反應，以便在處方工藝的研究中采取針對性的措施，保障產(chǎn)品能夠采用濕熱滅菌工藝。處方工藝的研究在對活性成分的結構特點與穩(wěn)定性進行研究的基礎上，可以有針對性的進行處方工藝的優(yōu)化研究。如活性成分易發(fā)生氧化反應，則需要考慮是否需要在工藝中去除氧并采取充氮的生產(chǎn)工藝，或在處方中加入適宜的抗氧劑；如活性成分的穩(wěn)定性與pH值相關，則需要通過研究尋找最利于主成分穩(wěn)定性的pH值，當然此時需要關注該pH值在臨床治療時能否接受；如果主成分是因為某些雜質(zhì)的存在影響了穩(wěn)定性，則需要通過適宜的手段去除相關的雜質(zhì)；如果是主成分在某種溶劑系統(tǒng)中穩(wěn)定性較差，則需要考慮更換溶劑系統(tǒng)，此時同樣需要考慮所選用的溶劑系統(tǒng)在臨床應用時能否被接受；濕熱滅菌的不同滅菌溫度和滅菌時間的組合對產(chǎn)品的穩(wěn)定性的要求有所不同，可以在保證提供所需的SAL的基礎上，通過滅菌時間和滅菌溫度的調(diào)整來確定藥物可以耐受的濕熱滅菌工藝?？傊枰ㄟ^各個方面的研究，使藥物盡可能的可以采用濕熱滅菌工藝。只有在理論和實踐均證明即使采用了各種可行的技術方法之后，活性成分依然無法耐受濕熱滅菌的工藝時，才能選擇無菌保證水平較低的無菌生產(chǎn)工藝。2.無論使用何種設計方法，都需要進行最終滅菌產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究?？疾熳罱K滅菌程序對產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定性影響的試驗可包括產(chǎn)品的降解、含量、pH值、顏色、緩沖能力以及產(chǎn)品的其它質(zhì)量特性。滅菌時，殺滅微生物的效果和活性成分的降解都隨著時間和溫度而累積。這意味著加熱和冷卻的變化將影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性，同時影響殺滅效果。因此，穩(wěn)定性研究用樣品最好選取處于最苛刻的滅菌條件的產(chǎn)品，如：可采用在熱穿透試驗中F0最大的位置上滅菌的產(chǎn)品進行穩(wěn)定性考察，以確保滅菌產(chǎn)品的質(zhì)量仍能符合要求。通常來說，與殘存概率法相比，過度滅殺法所需的被滅菌品開始生產(chǎn)階段和日常監(jiān)控階段生物負荷的信息較少，但是過度殺滅要求的熱能比較大，其后果是被滅菌品降解的可能性增大。過度殺滅法的目標是確保達到一定程度的無菌保證水平，而不管被滅菌產(chǎn)品初始菌的數(shù)量及其耐熱性如何。過度殺滅法假設的生物負荷和耐熱性都高于實際數(shù)，而大多數(shù)微生物的耐熱性都比較低，很少發(fā)現(xiàn)自然生成的微生物的D121℃。因此，過度殺滅的滅菌程序理論上能完全殺滅微生物，從而能提供很高的無菌保證值。由于該方法已經(jīng)對生物負荷及耐熱性作了最壞的假設，從技術角度看，對被滅菌品進行初始菌監(jiān)控就沒有多大必要了。但這并不意味著生產(chǎn)過程中對污染可以完全不加控制。僅從控制熱原的角度，也應當遵循工藝衛(wèi)生規(guī)范，控制產(chǎn)品的微生物污染。如果實際生產(chǎn)中能夠嚴格遵循GMP的要求，這一點是可以實現(xiàn)的。與過度殺滅法相比，殘存概率法方法所需的信息量要大得多，包括被滅菌品生產(chǎn)開始階段及常規(guī)生產(chǎn)階段的信息、指示菌（對滅菌程序呈現(xiàn)強耐熱性的試驗菌）以及生物負荷的信息。只有積累了這類有價值的信息后，才能制定比過度殺滅法F0值低的熱力滅菌程序，同時產(chǎn)品的無菌保證水平不會降低。使用熱力較低滅菌程序更有利于藥品的穩(wěn)定性，使產(chǎn)品的有效期延長。正是因為這個原因，殘存概率法更適合那些處方耐熱性較差的最終滅菌產(chǎn)品。通常說來，不耐熱藥品的滅菌可能不能使用過度殺滅法，需要設計一個滅菌程序能夠恰當?shù)貧缟镓摵?，同時不導致產(chǎn)品不可接受的降解。這種情況下，滅菌程序的確認就需研究產(chǎn)品的生物負荷和耐熱性。根據(jù)以下公式可以比較清楚的說明這一點：