【正文】 無(wú)菌制劑工藝 cGMP指南 目錄 一、簡(jiǎn)介和框架 二、無(wú)菌制劑對(duì)環(huán)境、設(shè)施設(shè)備要求 三、人員要求 四、對(duì)組分和密封件要求 五、對(duì)內(nèi)毒素控制 六、對(duì)生產(chǎn)時(shí)間限制 七、對(duì)無(wú)菌工藝和滅菌方法驗(yàn)證 八、對(duì)實(shí)驗(yàn)室的控制 九、無(wú)菌測(cè)試要求 十、對(duì)批記錄的審核 十一、 附錄 附錄 （略） 附件 和封口操作前的工藝技術(shù) 十二、相關(guān)指南和術(shù)語(yǔ)（略） 一、簡(jiǎn)介和框架 ? 本無(wú)菌工藝 cGMP指南（ 2023－ 09）替代了 1987年的無(wú)菌工藝工業(yè)指南。 ? 本指南主要是針對(duì)無(wú)菌產(chǎn)品和生物制劑 產(chǎn)品的無(wú)菌工藝要求的 GMP指南 。 ? 本指南應(yīng)結(jié)合“人用藥 /獸用藥新藥申請(qǐng)－無(wú)菌工藝驗(yàn)證文件遞交指南”一起指導(dǎo)工業(yè)企業(yè)的無(wú)菌工藝生產(chǎn)。 ? 本指南不具有任何的法律約束力。 ? 藥政框架－－本指南從屬于藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（ 21CFRparts210和 211）；對(duì)于生物制劑產(chǎn)品從屬于 21CFRparts600和 680的監(jiān)管，并對(duì)其無(wú)菌工藝做了增補(bǔ)的要求。 ? 技術(shù)框架－－本文的無(wú)菌工藝和終端產(chǎn)品滅菌工藝有本質(zhì)上的區(qū)別： ? 以 終端滅菌工藝 的產(chǎn)品在高質(zhì)量的環(huán)境下進(jìn)行灌封，但此種產(chǎn)品及其生產(chǎn)環(huán)境、容器和密封系統(tǒng)并非完全無(wú)菌，最終產(chǎn)品需要進(jìn)行熱壓或幅射滅菌。 ? 無(wú)菌工藝 的產(chǎn)品、容器 /密封件都必須事先 分別 用無(wú)菌方法處理，再于嚴(yán)格控制的環(huán)境下操作成最終的產(chǎn)品，其最終產(chǎn)品不能進(jìn)行滅菌操作。因此無(wú)菌工藝含有更多的工藝變量，各組成部分的滅菌方法也不盡相同，過(guò)程引入的偏差環(huán)節(jié)較多，其任何的人為操作都是潛在的污染源。 ? 只有不適用終端滅菌處理的產(chǎn)品才考慮用無(wú)菌工藝過(guò)程。 二、無(wú)菌制劑對(duì)廠房設(shè)施設(shè)備要求 ?對(duì)無(wú)菌工藝制劑的潔凈區(qū)必須有監(jiān)控微粒和微生物的設(shè)施； ?其潔凈廠房在使用前必須進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試合格，否則認(rèn)為驗(yàn)收不合格； ?其潔凈廠房的潔凈級(jí)別劃分必須以動(dòng)態(tài)條件下測(cè)試的數(shù)據(jù)為準(zhǔn)； ?必須用日常的動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)監(jiān)控證明其潔凈級(jí)別始終如一。 潔凈 級(jí)別 ISO對(duì) 應(yīng)級(jí)別 顆粒度 (≥) 懸浮菌 （ cfu/m3) 沉降菌 Φ90mm培養(yǎng)皿 cfu/4h 100 5 3520 1 1 1000 6 35200 7 3 10000 7 352023 10 5 100000 8 3520230 100 50 注：以上數(shù)據(jù)均為靜態(tài)下的測(cè)試，動(dòng)態(tài) 100級(jí)相當(dāng)于靜態(tài)的 1000級(jí)，以此類推。 EU將潔凈區(qū)的級(jí)別劃分 為 A、 B、 C、 D四級(jí) ， 其中 A、 B為 100級(jí) （ A級(jí) 主用于 100級(jí)無(wú)菌區(qū)、 B級(jí) 主用于 100級(jí)潔凈區(qū)， C為 1萬(wàn)級(jí)、 D為 10萬(wàn)級(jí)。它們對(duì)懸浮粒子（個(gè) /m3）規(guī)定如下： 潔凈級(jí)別 靜態(tài) 動(dòng)態(tài) ≥ ≥5um ≥ ≥5um A 3500 0 3500 0 B 3500 0 350000 2023 C 350000 2023 3500000 20230 D 3500000 20230 未定義 未定義 ? 關(guān)鍵區(qū)域定義：無(wú)菌藥物和容器及密封件所暴露的環(huán)境區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必須可以維持產(chǎn)品在無(wú)菌的狀態(tài)（如無(wú)菌過(guò)濾和無(wú)菌灌封）。 ? 關(guān)鍵區(qū)域的操作活動(dòng)包括：灌裝和封口之前及過(guò)程中的無(wú)菌物料的操作，如無(wú)菌連接和無(wú)菌組分的添加。 ? 無(wú)菌區(qū)域必須控制 ≥，在使用后必須在動(dòng)態(tài)測(cè)試下符合 100級(jí) 要求。動(dòng)態(tài)檢測(cè)時(shí)的檢測(cè)距離為在氣流范圍內(nèi)離操作區(qū) ≤1英尺（ ） ? 塵埃粒子計(jì)數(shù)器的放置和采樣口的朝向必須合理，以獲得有效的樣品。（ 對(duì)于 HEPA安裝在房間頂棚上的潔凈區(qū)，其塵埃粒子計(jì)數(shù)器應(yīng)放在 離地 ～ 1m處，采樣口朝上 。） ? 日常生產(chǎn)每班都應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌區(qū)顆粒度的監(jiān)測(cè)（ FDA無(wú)菌工藝 cGMP指南 建議 使用 遠(yuǎn)程技術(shù) 來(lái)實(shí)現(xiàn)）。 ? 可以采用動(dòng)態(tài)條件下操作前的顆粒水平來(lái)判定有否外源性顆粒污染。 ? 應(yīng)采用能維持單向流的高效空氣清除關(guān)鍵區(qū)域的顆粒。應(yīng)控制區(qū)域中的紊流和靜置空氣的產(chǎn)生，因?yàn)樗鼈優(yōu)榭諝馕廴咎峁┝饲馈? ? 應(yīng)有完整的測(cè)試記錄來(lái)分析證明其空氣流是否為單向，并且要有書面的結(jié)論（涵蓋對(duì)無(wú)菌操作和設(shè)備設(shè)計(jì)的影響評(píng)詁）?？梢杂娩浵窕蛘障裥问阶C明氣體流動(dòng)的方向。 ? 關(guān)鍵區(qū)域的空氣監(jiān)測(cè)結(jié)果是最終沒(méi)有微生物的污染，如果發(fā)生則應(yīng)高度重視并調(diào)查。 ? 支持區(qū)域的定義：用于制備、貯存或轉(zhuǎn)移非無(wú)菌組分、配方產(chǎn)品、中控物質(zhì)、設(shè)備、容器密封件的區(qū)域。 ? FDA推薦直接臨近無(wú)菌工藝生產(chǎn)的支持區(qū)域在 動(dòng)態(tài)條件 下至少應(yīng)達(dá)到 萬(wàn)級(jí)（ ISO7）。 工廠可以采用 千級(jí)（ ISO6） 或維持整個(gè)無(wú)菌灌封間在 百級(jí)（ ISO5）。 ? 預(yù)防 污染的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于對(duì)不同操作區(qū)域間的有效隔離，應(yīng)確保潔凈區(qū)的空氣流以合適方式 從高級(jí)別區(qū) 流向相鄰的 低級(jí)別區(qū) 。在高級(jí)別區(qū)和低級(jí)別區(qū)之間應(yīng)至少保持 10～ 15Pa的 正 壓差。 ? 進(jìn)入無(wú)菌工藝操作間的更衣室和緩沖間的潔凈級(jí)別應(yīng)與無(wú)菌操作間的潔凈級(jí)別一致。 ? 無(wú)菌操作間與其鄰近的無(wú)任何潔凈級(jí)別要求的房間必須始終保持 ≥。如果壓差低于設(shè)定的最低限值，必須對(duì)無(wú)菌操作間的環(huán)境質(zhì)量進(jìn)行修復(fù)和再確認(rèn)。 ? 對(duì)于低壓差的發(fā)生應(yīng)有報(bào)警裝置進(jìn)行監(jiān)控，任何的報(bào)警必須有記錄、任何的偏差必須調(diào)查。 例如： cGMP (C) 作業(yè)在特定區(qū)域進(jìn)行（無(wú)菌操作） 經(jīng)ＨＥＰＡ過(guò)濾器過(guò)濾的空氣向作業(yè)區(qū)供給 ? 常用氣體過(guò)濾的－－ 疏水性 材料－－ PTFE（聚四氟乙烯），使用中必須 干燥（應(yīng)防冷凝水的堵塞和微生物的生長(zhǎng)）。 ? 常用藥液過(guò)濾的－－ 親水性 材料－－聚砜 ? 常用注射劑用水過(guò)濾的－－ 親水性 材料－－ PVDF（聚偏二 氟乙烯）。 上述材料常用作筒式過(guò)濾器的濾芯。 ? FDA規(guī)定對(duì)用于無(wú)菌產(chǎn)品的過(guò)濾器應(yīng)進(jìn)行 微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)、無(wú)菌過(guò)濾性能試驗(yàn)和完整性（起泡點(diǎn)）試驗(yàn)（使用前后）。其中微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用戶可以要求過(guò)濾器的制造商來(lái)完成，無(wú)菌用過(guò)濾器對(duì)數(shù)細(xì)菌減少量應(yīng)＞ 7。過(guò)濾器必須進(jìn)行周期性更換。 ? 在對(duì)無(wú)菌藥液過(guò)濾器的驗(yàn)證中除了完成上述三項(xiàng)試驗(yàn)外，還應(yīng)對(duì)過(guò)濾器的 溶出物檢查、過(guò)濾器的清潔度檢查及與藥液適應(yīng)性試驗(yàn) （具體方法參見(jiàn)中國(guó) GMP驗(yàn)證指南中凍干粉針劑驗(yàn)證的有關(guān)內(nèi)容）。 HEPA的要求 ? HEPA的完整性必須維持無(wú)菌的生產(chǎn)條件，在安裝時(shí)必須做檢漏測(cè)試。（美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209A和 209B指出： 如果 HEPA的泄漏試驗(yàn)和空氣流速測(cè)試均合格，則潔凈室的空氣潔凈度是不難達(dá)到的，此兩項(xiàng)運(yùn)行檢驗(yàn)比在含極少微粒的部位進(jìn)行微粒計(jì)數(shù)測(cè)定的做法更有意義， 故其重要性不亞于粒子測(cè)定。） ? 檢測(cè)位置 ：邊框、濾器表面。 ? 檢漏方法 ： DOP氣溶膠法和 PAO氣溶膠法 （ DOP－鄰苯二甲酸二辛脂、 PAO－聚 α烯烴） （ DOP法因?yàn)橛型蛔冃?，現(xiàn)國(guó)外已 w全部改用 PAO作為氣溶膠煙霧劑）。 ? 取樣速度和距離 ： 每分鐘 1立方英尺 (－－ 中國(guó)驗(yàn)證指南的取樣速度為 3 ～ 5cm/s)，氣溶膠光度計(jì)的取樣口應(yīng)離濾器和邊框表面約 1～ 2英寸（ ～ －－ 中國(guó)驗(yàn)證指南的距離為 2 ～ 4cm ）。 ? 對(duì)于替代的煙霧劑應(yīng)評(píng)詁其對(duì)微生物生長(zhǎng)是否有促進(jìn)作用，以排除替代的煙霧劑 對(duì) HEPA造成微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。 ? HEPA的 過(guò)濾效率 應(yīng)能夠截留 %的大于 。 ? 無(wú)菌工藝的 HEPA檢漏應(yīng)有適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔確認(rèn)，每年最少檢查 2次。當(dāng)空氣潔凈度不合格或可能引起墻壁或屋頂結(jié)構(gòu)變化的設(shè)施翻修或培養(yǎng)基灌裝失敗或藥物無(wú)菌測(cè)試失敗時(shí)，必須 加做額外 的檢漏測(cè)試。 ? HEPA檢漏測(cè)試必須有完整的書面記錄備查，一旦發(fā)現(xiàn)氣溶膠光度計(jì)的讀數(shù) ≥%時(shí)表明有泄漏，應(yīng)及時(shí)更換或維修，更換維修后必須重新測(cè)試。 ? 通過(guò) HEPA過(guò)濾器的空氣速度均一性的周期性確認(rèn)非常重要，其速度的變化會(huì)造成紊流而增加污染的風(fēng)險(xiǎn)。其單向氣流速度的測(cè)定必須于距離過(guò)濾器表面約 6英寸（ ） 處進(jìn)行測(cè)試，或是在無(wú)菌操作關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)過(guò)濾器工作表面中心的確定距離內(nèi)測(cè)定。如果檢測(cè)為非單向氣流或是有副作用的氣流模式，都必須更換 HEPA。 無(wú)菌環(huán)境的設(shè)計(jì)注意點(diǎn) /認(rèn)證 空調(diào)設(shè)備的設(shè)計(jì)／認(rèn)證 （ 原 FDA檢察官提出事項(xiàng)） ∫∫網(wǎng)框的間隙（無(wú)空氣滯留） ∫∫氣流監(jiān)控錄像的保管 ?總則： 無(wú)菌工藝要求盡可能的減少潛在的污染。必須控制產(chǎn)品暴露的時(shí)限，提供最高級(jí)別的環(huán)境控制，優(yōu)化工藝路線和防止低質(zhì)量空氣進(jìn)入Class100的設(shè)備設(shè)計(jì)都是高度無(wú)菌確認(rèn)的關(guān)鍵。 －優(yōu)化人流物流，防止無(wú)必要的活動(dòng)發(fā)生； －設(shè)備的布局必須符合人體工程學(xué)的要求，優(yōu)化操作工的操作； －必須盡可能的減少操作工人數(shù)； －人流的設(shè)計(jì)必須盡可能限制人員進(jìn)出無(wú)菌工藝間的頻率； －必須盡量減少關(guān)鍵區(qū)域和一般潔凈區(qū)域或隔離器之間的傳遞次數(shù)； －必須限制在關(guān)鍵區(qū)域旁的活動(dòng)，以防止低質(zhì)量空氣的引入。 ? 無(wú)菌工藝中所用的設(shè)備必須有適當(dāng)?shù)脑O(shè)計(jì)防止人為的干擾和打斷（ 增加污染的危險(xiǎn)因素 ）。如：使用在線稱量裝置可減少重復(fù)的手動(dòng)操作，使用 SIP滅菌處理預(yù)裝備的連接可減少滅菌操作，其他工藝路線的自動(dòng)化操作可降低產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)。 ? 產(chǎn)品必須在合適的潔凈級(jí)別下進(jìn)行轉(zhuǎn)移。例如：凍干工藝的半壓塞產(chǎn)品只能在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)轉(zhuǎn)移，設(shè)施設(shè)計(jì)必須確保灌裝生產(chǎn)線和凍干機(jī)在 Class100保護(hù)下，轉(zhuǎn)移和御載操作也必須受到相同級(jí)別的保護(hù)。 ? 如果無(wú)菌工藝區(qū)或軋蓋前房間內(nèi)有帶塞小瓶（即未軋蓋的產(chǎn)品），必須有局部保護(hù)措施防止產(chǎn)品受到污染，使用儀器在線檢測(cè)裝配不適當(dāng)?shù)娜右蕴峁╊~外的質(zhì)量保證（ 待軋蓋產(chǎn)品在運(yùn)輸過(guò)程中的塞子突起 ）。 ? 無(wú)菌隔離系統(tǒng)的使用可以更好的保護(hù)產(chǎn)品不受人為污染 。 ? 必須仔細(xì)定義和控制各房間之間的 動(dòng)態(tài)過(guò)程 。可以使用雙門或集成滅菌器確保低級(jí)別區(qū)到高級(jí)別區(qū)的正確合適的直接物流；使用氣閘室和聯(lián)鎖門控制無(wú)菌工藝設(shè)施內(nèi)空氣壓力，無(wú)菌制造區(qū)域入口處和其他無(wú)級(jí)別區(qū)的鄰近處必須設(shè)氣閘室；當(dāng)人員和物料從低級(jí)別區(qū)域進(jìn)入高級(jí)別區(qū)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格采取措施防止污染（ 如必要的洗手消毒、更衣、物料的滅菌等規(guī)程 ）。 ? 建造潔凈區(qū)的材料必須容易清洗和消毒，如無(wú)縫和弧形設(shè)計(jì)的墻角、平整堅(jiān)硬的頂棚 /墻壁 /地板、不藏塵 HEPA框架等。 ? 工藝設(shè)備和系統(tǒng)必須配備衛(wèi)生裝置和閥門。無(wú)菌工藝操作間內(nèi)應(yīng) 不設(shè) 下水道（地漏），如果不可避免，那么任何這樣的設(shè)施都必須有設(shè)計(jì)說(shuō)明。 ? 設(shè)備應(yīng)便于安裝拆御和無(wú)菌處理；不阻礙潔凈區(qū)氣流，在關(guān)鍵區(qū)不得打亂單向氣流；對(duì)潔凈區(qū)環(huán)境的影響必須有足夠的說(shuō)明；沒(méi)有積累顆粒的水平表面和突起部位。 ? 因非正常情況導(dǎo)致的空氣系統(tǒng)或其他設(shè)施的停機(jī)，以及建造活動(dòng)對(duì)設(shè)施的影響等必須在偏差和變更控制系統(tǒng)中加以說(shuō)明解釋，必須有書面的程序說(shuō)明在停機(jī)后如何恢復(fù)正常運(yùn)行。 圖例： 1） .無(wú)菌操作的微生物污染控制 圖例 2） .環(huán)境區(qū)域劃分和正確的更衣事例 三、人員要求 ?質(zhì)量部門必須為制造操作提供常規(guī)的監(jiān)督以確保操作人員的無(wú)菌操作始終符合已建立的書面規(guī)程。 ?任何人在進(jìn)入無(wú)菌操作區(qū)前必須接受如下培訓(xùn)內(nèi)容的培訓(xùn)： ? 消毒技術(shù)和更衣操作； ? 微生物學(xué)和衛(wèi)生學(xué)； ? 精制包裝行為準(zhǔn)則； ? 非無(wú)菌藥物造成的病人安全性危害； ? 無(wú)菌制造區(qū)域內(nèi)的所有書面操作規(guī)程等。 （ 以上內(nèi)容的培訓(xùn)，在日常工作中，主管人員應(yīng)每天評(píng)詁每個(gè)操作員工在實(shí)際操作中是否按書面規(guī)程操作。 ） ?維持無(wú)菌物品和表面無(wú)菌狀態(tài)的人員操作技術(shù)有： ? 只使用無(wú)菌器具接觸無(wú)菌物料，為防止物料間的交叉污染，應(yīng)根據(jù)需要及時(shí)更換無(wú)菌器具；在更衣后無(wú)菌手套必須經(jīng)常消毒或更換，應(yīng)避免將衣物和手套直接接觸無(wú)菌產(chǎn)品和容器； ? 人員的移動(dòng)必須緩慢，必須有目的的移動(dòng)，應(yīng)避免因漫無(wú)目的的移動(dòng)而造成的單向氣流混亂； ? 為避免無(wú)菌產(chǎn)品受污染，應(yīng)確保操作人員的身體處于單向氣流之外； ? 操作人員進(jìn)行的必需的無(wú)菌操作不得危害產(chǎn)品的無(wú)菌性，應(yīng)避免垂直操作打亂單向氣流，應(yīng)避免在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)說(shuō)話；（ 通常從側(cè)面的操作可以確保無(wú)菌產(chǎn)品周期的無(wú)菌條件 ）。 ? 無(wú)菌操作之前和整個(gè)過(guò)程中必須避免著裝的意外污染（ 著裝