【正文】 無菌制劑工藝 cGMP指南 目錄 一、簡介和框架 二、無菌制劑對環(huán)境、設施設備要求 三、人員要求 四、對組分和密封件要求 五、對內(nèi)毒素控制 六、對生產(chǎn)時間限制 七、對無菌工藝和滅菌方法驗證 八、對實驗室的控制 九、無菌測試要求 十、對批記錄的審核 十一、 附錄 附錄 （略） 附件 和封口操作前的工藝技術 十二、相關指南和術語（略） 一、簡介和框架 ? 本無菌工藝 cGMP指南（ 2023－ 09）替代了 1987年的無菌工藝工業(yè)指南。 ? 本指南主要是針對無菌產(chǎn)品和生物制劑 產(chǎn)品的無菌工藝要求的 GMP指南 。 ? 本指南應結合“人用藥 /獸用藥新藥申請－無菌工藝驗證文件遞交指南”一起指導工業(yè)企業(yè)的無菌工藝生產(chǎn)。 ? 本指南不具有任何的法律約束力。 ? 藥政框架－－本指南從屬于藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（ 21CFRparts210和 211）；對于生物制劑產(chǎn)品從屬于 21CFRparts600和 680的監(jiān)管，并對其無菌工藝做了增補的要求。 ? 技術框架－－本文的無菌工藝和終端產(chǎn)品滅菌工藝有本質(zhì)上的區(qū)別： ? 以 終端滅菌工藝 的產(chǎn)品在高質(zhì)量的環(huán)境下進行灌封，但此種產(chǎn)品及其生產(chǎn)環(huán)境、容器和密封系統(tǒng)并非完全無菌，最終產(chǎn)品需要進行熱壓或幅射滅菌。 ? 無菌工藝 的產(chǎn)品、容器 /密封件都必須事先 分別 用無菌方法處理，再于嚴格控制的環(huán)境下操作成最終的產(chǎn)品，其最終產(chǎn)品不能進行滅菌操作。因此無菌工藝含有更多的工藝變量，各組成部分的滅菌方法也不盡相同，過程引入的偏差環(huán)節(jié)較多，其任何的人為操作都是潛在的污染源。 ? 只有不適用終端滅菌處理的產(chǎn)品才考慮用無菌工藝過程。 二、無菌制劑對廠房設施設備要求 ?對無菌工藝制劑的潔凈區(qū)必須有監(jiān)控微粒和微生物的設施； ?其潔凈廠房在使用前必須進行靜態(tài)測試合格，否則認為驗收不合格； ?其潔凈廠房的潔凈級別劃分必須以動態(tài)條件下測試的數(shù)據(jù)為準； ?必須用日常的動態(tài)數(shù)據(jù)監(jiān)控證明其潔凈級別始終如一。 潔凈 級別 ISO對 應級別 顆粒度 (≥) 懸浮菌 （ cfu/m3) 沉降菌 Φ90mm培養(yǎng)皿 cfu/4h 100 5 3520 1 1 1000 6 35200 7 3 10000 7 352023 10 5 100000 8 3520230 100 50 注：以上數(shù)據(jù)均為靜態(tài)下的測試，動態(tài) 100級相當于靜態(tài)的 1000級，以此類推。 EU將潔凈區(qū)的級別劃分 為 A、 B、 C、 D四級 ， 其中 A、 B為 100級 （ A級 主用于 100級無菌區(qū)、 B級 主用于 100級潔凈區(qū)， C為 1萬級、 D為 10萬級。它們對懸浮粒子（個 /m3）規(guī)定如下： 潔凈級別 靜態(tài) 動態(tài) ≥ ≥5um ≥ ≥5um A 3500 0 3500 0 B 3500 0 350000 2023 C 350000 2023 3500000 20230 D 3500000 20230 未定義 未定義 ? 關鍵區(qū)域定義：無菌藥物和容器及密封件所暴露的環(huán)境區(qū)域，這個區(qū)域必須可以維持產(chǎn)品在無菌的狀態(tài)（如無菌過濾和無菌灌封）。 ? 關鍵區(qū)域的操作活動包括：灌裝和封口之前及過程中的無菌物料的操作，如無菌連接和無菌組分的添加。 ? 無菌區(qū)域必須控制 ≥，在使用后必須在動態(tài)測試下符合 100級 要求。動態(tài)檢測時的檢測距離為在氣流范圍內(nèi)離操作區(qū) ≤1英尺（ ） ? 塵埃粒子計數(shù)器的放置和采樣口的朝向必須合理，以獲得有效的樣品。（ 對于 HEPA安裝在房間頂棚上的潔凈區(qū)，其塵埃粒子計數(shù)器應放在 離地 ～ 1m處，采樣口朝上 。） ? 日常生產(chǎn)每班都應進行無菌區(qū)顆粒度的監(jiān)測（ FDA無菌工藝 cGMP指南 建議 使用 遠程技術 來實現(xiàn)）。 ? 可以采用動態(tài)條件下操作前的顆粒水平來判定有否外源性顆粒污染。 ? 應采用能維持單向流的高效空氣清除關鍵區(qū)域的顆粒。應控制區(qū)域中的紊流和靜置空氣的產(chǎn)生，因為它們?yōu)榭諝馕廴咎峁┝饲馈? ? 應有完整的測試記錄來分析證明其空氣流是否為單向，并且要有書面的結論（涵蓋對無菌操作和設備設計的影響評詁）?？梢杂娩浵窕蛘障裥问阶C明氣體流動的方向。 ? 關鍵區(qū)域的空氣監(jiān)測結果是最終沒有微生物的污染，如果發(fā)生則應高度重視并調(diào)查。 ? 支持區(qū)域的定義：用于制備、貯存或轉(zhuǎn)移非無菌組分、配方產(chǎn)品、中控物質(zhì)、設備、容器密封件的區(qū)域。 ? FDA推薦直接臨近無菌工藝生產(chǎn)的支持區(qū)域在 動態(tài)條件 下至少應達到 萬級（ ISO7）。 工廠可以采用 千級（ ISO6） 或維持整個無菌灌封間在 百級（ ISO5）。 ? 預防 污染的一個關鍵環(huán)節(jié)在于對不同操作區(qū)域間的有效隔離，應確保潔凈區(qū)的空氣流以合適方式 從高級別區(qū) 流向相鄰的 低級別區(qū) 。在高級別區(qū)和低級別區(qū)之間應至少保持 10～ 15Pa的 正 壓差。 ? 進入無菌工藝操作間的更衣室和緩沖間的潔凈級別應與無菌操作間的潔凈級別一致。 ? 無菌操作間與其鄰近的無任何潔凈級別要求的房間必須始終保持 ≥。如果壓差低于設定的最低限值，必須對無菌操作間的環(huán)境質(zhì)量進行修復和再確認。 ? 對于低壓差的發(fā)生應有報警裝置進行監(jiān)控，任何的報警必須有記錄、任何的偏差必須調(diào)查。 例如： cGMP (C) 作業(yè)在特定區(qū)域進行（無菌操作） 經(jīng)ＨＥＰＡ過濾器過濾的空氣向作業(yè)區(qū)供給 ? 常用氣體過濾的－－ 疏水性 材料－－ PTFE（聚四氟乙烯），使用中必須 干燥（應防冷凝水的堵塞和微生物的生長）。 ? 常用藥液過濾的－－ 親水性 材料－－聚砜 ? 常用注射劑用水過濾的－－ 親水性 材料－－ PVDF（聚偏二 氟乙烯）。 上述材料常用作筒式過濾器的濾芯。 ? FDA規(guī)定對用于無菌產(chǎn)品的過濾器應進行 微生物挑戰(zhàn)性試驗、無菌過濾性能試驗和完整性（起泡點）試驗（使用前后）。其中微生物挑戰(zhàn)性試驗用戶可以要求過濾器的制造商來完成，無菌用過濾器對數(shù)細菌減少量應＞ 7。過濾器必須進行周期性更換。 ? 在對無菌藥液過濾器的驗證中除了完成上述三項試驗外，還應對過濾器的 溶出物檢查、過濾器的清潔度檢查及與藥液適應性試驗 （具體方法參見中國 GMP驗證指南中凍干粉針劑驗證的有關內(nèi)容）。 HEPA的要求 ? HEPA的完整性必須維持無菌的生產(chǎn)條件，在安裝時必須做檢漏測試。（美國聯(lián)邦標準 209A和 209B指出： 如果 HEPA的泄漏試驗和空氣流速測試均合格，則潔凈室的空氣潔凈度是不難達到的，此兩項運行檢驗比在含極少微粒的部位進行微粒計數(shù)測定的做法更有意義， 故其重要性不亞于粒子測定。） ? 檢測位置 ：邊框、濾器表面。 ? 檢漏方法 ： DOP氣溶膠法和 PAO氣溶膠法 （ DOP－鄰苯二甲酸二辛脂、 PAO－聚 α烯烴） （ DOP法因為有突變性，現(xiàn)國外已 w全部改用 PAO作為氣溶膠煙霧劑）。 ? 取樣速度和距離 ： 每分鐘 1立方英尺 (－－ 中國驗證指南的取樣速度為 3 ～ 5cm/s)，氣溶膠光度計的取樣口應離濾器和邊框表面約 1～ 2英寸（ ～ －－ 中國驗證指南的距離為 2 ～ 4cm ）。 ? 對于替代的煙霧劑應評詁其對微生物生長是否有促進作用，以排除替代的煙霧劑 對 HEPA造成微生物污染的風險。 ? HEPA的 過濾效率 應能夠截留 %的大于 。 ? 無菌工藝的 HEPA檢漏應有適當?shù)臅r間間隔確認，每年最少檢查 2次。當空氣潔凈度不合格或可能引起墻壁或屋頂結構變化的設施翻修或培養(yǎng)基灌裝失敗或藥物無菌測試失敗時，必須 加做額外 的檢漏測試。 ? HEPA檢漏測試必須有完整的書面記錄備查，一旦發(fā)現(xiàn)氣溶膠光度計的讀數(shù) ≥%時表明有泄漏，應及時更換或維修，更換維修后必須重新測試。 ? 通過 HEPA過濾器的空氣速度均一性的周期性確認非常重要，其速度的變化會造成紊流而增加污染的風險。其單向氣流速度的測定必須于距離過濾器表面約 6英寸（ ） 處進行測試，或是在無菌操作關鍵區(qū)域內(nèi)過濾器工作表面中心的確定距離內(nèi)測定。如果檢測為非單向氣流或是有副作用的氣流模式，都必須更換 HEPA。 無菌環(huán)境的設計注意點 /認證 空調(diào)設備的設計／認證 （ 原 FDA檢察官提出事項） ∫∫網(wǎng)框的間隙（無空氣滯留） ∫∫氣流監(jiān)控錄像的保管 ?總則： 無菌工藝要求盡可能的減少潛在的污染。必須控制產(chǎn)品暴露的時限，提供最高級別的環(huán)境控制，優(yōu)化工藝路線和防止低質(zhì)量空氣進入Class100的設備設計都是高度無菌確認的關鍵。 －優(yōu)化人流物流，防止無必要的活動發(fā)生； －設備的布局必須符合人體工程學的要求，優(yōu)化操作工的操作； －必須盡可能的減少操作工人數(shù)； －人流的設計必須盡可能限制人員進出無菌工藝間的頻率； －必須盡量減少關鍵區(qū)域和一般潔凈區(qū)域或隔離器之間的傳遞次數(shù)； －必須限制在關鍵區(qū)域旁的活動，以防止低質(zhì)量空氣的引入。 ? 無菌工藝中所用的設備必須有適當?shù)脑O計防止人為的干擾和打斷（ 增加污染的危險因素 ）。如：使用在線稱量裝置可減少重復的手動操作，使用 SIP滅菌處理預裝備的連接可減少滅菌操作，其他工藝路線的自動化操作可降低產(chǎn)品污染的風險。 ? 產(chǎn)品必須在合適的潔凈級別下進行轉(zhuǎn)移。例如：凍干工藝的半壓塞產(chǎn)品只能在關鍵區(qū)域內(nèi)轉(zhuǎn)移，設施設計必須確保灌裝生產(chǎn)線和凍干機在 Class100保護下，轉(zhuǎn)移和御載操作也必須受到相同級別的保護。 ? 如果無菌工藝區(qū)或軋蓋前房間內(nèi)有帶塞小瓶（即未軋蓋的產(chǎn)品），必須有局部保護措施防止產(chǎn)品受到污染，使用儀器在線檢測裝配不適當?shù)娜右蕴峁╊~外的質(zhì)量保證（ 待軋蓋產(chǎn)品在運輸過程中的塞子突起 ）。 ? 無菌隔離系統(tǒng)的使用可以更好的保護產(chǎn)品不受人為污染 。 ? 必須仔細定義和控制各房間之間的 動態(tài)過程 ?？梢允褂秒p門或集成滅菌器確保低級別區(qū)到高級別區(qū)的正確合適的直接物流；使用氣閘室和聯(lián)鎖門控制無菌工藝設施內(nèi)空氣壓力，無菌制造區(qū)域入口處和其他無級別區(qū)的鄰近處必須設氣閘室；當人員和物料從低級別區(qū)域進入高級別區(qū)時應嚴格采取措施防止污染（ 如必要的洗手消毒、更衣、物料的滅菌等規(guī)程 ）。 ? 建造潔凈區(qū)的材料必須容易清洗和消毒，如無縫和弧形設計的墻角、平整堅硬的頂棚 /墻壁 /地板、不藏塵 HEPA框架等。 ? 工藝設備和系統(tǒng)必須配備衛(wèi)生裝置和閥門。無菌工藝操作間內(nèi)應 不設 下水道（地漏），如果不可避免，那么任何這樣的設施都必須有設計說明。 ? 設備應便于安裝拆御和無菌處理；不阻礙潔凈區(qū)氣流，在關鍵區(qū)不得打亂單向氣流；對潔凈區(qū)環(huán)境的影響必須有足夠的說明；沒有積累顆粒的水平表面和突起部位。 ? 因非正常情況導致的空氣系統(tǒng)或其他設施的停機，以及建造活動對設施的影響等必須在偏差和變更控制系統(tǒng)中加以說明解釋，必須有書面的程序說明在停機后如何恢復正常運行。 圖例： 1） .無菌操作的微生物污染控制 圖例 2） .環(huán)境區(qū)域劃分和正確的更衣事例 三、人員要求 ?質(zhì)量部門必須為制造操作提供常規(guī)的監(jiān)督以確保操作人員的無菌操作始終符合已建立的書面規(guī)程。 ?任何人在進入無菌操作區(qū)前必須接受如下培訓內(nèi)容的培訓： ? 消毒技術和更衣操作； ? 微生物學和衛(wèi)生學； ? 精制包裝行為準則； ? 非無菌藥物造成的病人安全性危害； ? 無菌制造區(qū)域內(nèi)的所有書面操作規(guī)程等。 （ 以上內(nèi)容的培訓，在日常工作中，主管人員應每天評詁每個操作員工在實際操作中是否按書面規(guī)程操作。 ） ?維持無菌物品和表面無菌狀態(tài)的人員操作技術有： ? 只使用無菌器具接觸無菌物料，為防止物料間的交叉污染，應根據(jù)需要及時更換無菌器具；在更衣后無菌手套必須經(jīng)常消毒或更換，應避免將衣物和手套直接接觸無菌產(chǎn)品和容器； ? 人員的移動必須緩慢，必須有目的的移動，應避免因漫無目的的移動而造成的單向氣流混亂； ? 為避免無菌產(chǎn)品受污染，應確保操作人員的身體處于單向氣流之外； ? 操作人員進行的必需的無菌操作不得危害產(chǎn)品的無菌性，應避免垂直操作打亂單向氣流，應避免在關鍵區(qū)域內(nèi)說話；（ 通常從側面的操作可以確保無菌產(chǎn)品周期的無菌條件 ）。 ? 無菌操作之前和整個過程中必須避免著裝的意外污染（ 著裝