【正文】 當(dāng)濕熱滅菌工藝的滅菌溫度確定后，L可以確定；生物指示劑確定后，Dbi可以確定；當(dāng)F0設(shè)定后，即可計(jì)算出生物指示劑的用量，即NO。F0/L；Dbi為所選用的生物指示劑的D值；NO為滅菌前容器內(nèi)初始孢子數(shù)。+1，其中FTlgNOFT/Dbi殘存曲線法當(dāng)濕熱滅菌工藝的滅菌溫度和滅菌時間確定后，L、t可以確定；生物指示劑確定后，Dbi可以確定；微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)方案確定后，n、q可以確定。Lt=lg(n/q)FO/Dbilg(n/q)=lgNtlgNO其中n為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)瓶樣品總數(shù)，q為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)結(jié)果為陰性的瓶數(shù))SLR=lgNOreduction，即孢子對數(shù)下降值，Dbi為所選用的生物指示劑的D值。其中SLR為sporeSLR=FO/DbiF0=Lt，其中L為滅菌溫度的滅菌率（Z=10），t為滅菌時間。陰性分?jǐn)?shù)法由以上的D值的測定方法可知，測定所需的儀器并不非常復(fù)雜，但需要專業(yè)技術(shù)人員和經(jīng)驗(yàn)的積累。時間的孢子的濃度。③計(jì)算：根據(jù)公式lgNt=lgN0t/D每隔13分鐘取出兩支毛細(xì)管并迅速冷卻，制備孢子溶液，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。一般可以采用毛細(xì)管暴熱計(jì)時法測定污染微生物的耐熱參數(shù)D值，測定主要包括以下幾個步驟：選擇最差條件時，應(yīng)考慮進(jìn)出人數(shù)（包括維修人員）、生產(chǎn)材料、設(shè)備設(shè)施在無菌區(qū)的暴露時間、設(shè)備滅菌后至開始灌裝前的間隔時間，以及微生物抑制因素（如溫度、氮保護(hù)、抗生素）的調(diào)整和消除等。并能夠充分模擬實(shí)際生產(chǎn)可能遇到的其它各種最差條件。常規(guī)生產(chǎn)批量較小的無菌原料藥，應(yīng)最大限度模擬大生產(chǎn)的批量。其中的過濾除菌系統(tǒng)驗(yàn)證可參考無菌制劑的相關(guān)要求，并重點(diǎn)關(guān)注進(jìn)入結(jié)晶罐的所有物料（如原料藥、溶媒、酸堿、氣體等）均應(yīng)除菌過濾，并進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證。采用終端滅菌工藝的無菌原料藥工藝驗(yàn)證可參考制劑終端滅菌工藝驗(yàn)證的相關(guān)要求。凍干工藝環(huán)節(jié)中應(yīng)關(guān)注的主要問題包括凍干機(jī)本身及附屬裝置的無菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期、設(shè)備的可清洗及可滅菌性；真空系統(tǒng)的保證及干燥后的壓力平衡，補(bǔ)氣過程的無菌保證（宜補(bǔ)充無菌氣體或者在凍干機(jī)上安裝除菌呼吸過濾器），以及物料進(jìn)出設(shè)備時的無菌保證。凍干無菌原料藥的典型流程包括原料藥的溶解、除菌過濾、冷凍干燥、粉碎、混合和分裝。分裝環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注分裝設(shè)備本身的無菌性或者其產(chǎn)品暴露潔凈級別是否達(dá)到A級區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)注內(nèi)包裝材料的無菌性、內(nèi)包裝材料的遞入方式、內(nèi)包裝容器的密封性以及取樣環(huán)節(jié)的無菌保證。粉碎環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置的可靠性；粉碎用氣體（如使用氣流粉碎機(jī)）的無菌保證、給料方式的無菌保證水平等。洗滌環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注洗滌溶劑的無菌性。結(jié)晶環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性及密封裝置的可靠性、設(shè)備的清洗及滅菌周期、呼吸器的完整性及無菌性；如需加入晶種，晶種本身應(yīng)符合無菌藥品的要求，并且應(yīng)驗(yàn)證晶種加入過程的無菌保證。溶解環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注物料的微生物負(fù)荷、溶劑的質(zhì)量、設(shè)備的微生物污染水平以及使用的料液輸送動力源（如空氣或氮?dú)猓┑奈⑸镂廴舅?。溶媒結(jié)晶工藝無菌原料藥常用工藝包括溶媒結(jié)晶和冷凍干燥兩種，前期國內(nèi)也有采用噴霧干燥工藝的無菌原料藥，但是多因?yàn)槠渖a(chǎn)工藝不能滿足無菌工藝的驗(yàn)證要求而逐漸被放棄或進(jìn)行了工藝變更。無菌原料的精制過程和除菌過程經(jīng)常結(jié)合在一起，作為生產(chǎn)工藝的一個單元操作來完成。由于多數(shù)原料藥的耐熱性較差，所以通常無菌原料藥采用非終端滅菌的方式生產(chǎn)。無菌原料藥可以通過最終滅菌或非最終滅菌的方式獲得。因此在生產(chǎn)設(shè)備、廠房設(shè)施、潔凈級別及監(jiān)測、滅菌工藝與方法及質(zhì)量控制要求等方面，無菌原料藥和無菌制劑的要求可以相互參考。該過程受料液性質(zhì)影響很大，需要根據(jù)料液的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)倪^濾器及濾芯的材質(zhì)。工藝過程中的物料、內(nèi)包裝材料、設(shè)備（包括閥門、管道等相關(guān)部件）的滅菌和無菌傳遞、對接、組裝等操作相比無菌制劑要復(fù)雜的多?；瘜W(xué)原料藥的常用生產(chǎn)工藝包括化學(xué)合成工藝、微生物發(fā)酵工藝，以及采用微生物發(fā)酵產(chǎn)品作為起始原料的半合成工藝；而原料藥的無菌工藝特指對制成的原料藥進(jìn)行無菌化處理的相關(guān)工藝，無菌工藝之前的生產(chǎn)過程不屬本章節(jié)的討論范疇。4原料藥無菌生產(chǎn)工藝吸附試驗(yàn)中采用的檢測方法可以采用產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所確定的相關(guān)檢測方法。過濾器中吸附性的材料包括濾膜、硬件和支撐性材料。吸附性研究由于過濾裝置與過濾料液或溶劑之間可能存在諸多化學(xué)相互作用，過濾器生產(chǎn)商所提供的代表性的化學(xué)相容性表通常只作為過濾器使用者的參考，過濾器使用者需要進(jìn)行更全面的測試。過濾器的相容性研究用來評估過濾裝置與料液的化學(xué)相容性，以避免可能的過濾器受損或變形，并能防止料液受到釋放物或微粒物質(zhì)的污染。在取得過濾器萃取液后，通過分析可以確定來自過濾器的物質(zhì)種類和含量。將萃取液收集并檢測，從而確定其中的過濾器析出物。采用靜態(tài)浸泡法時，過濾器在給定溫度的析出溶液中浸泡一段既定的時間。析出試驗(yàn)應(yīng)采用過濾裝置處于最劣生產(chǎn)條件時的接觸時間和溫度，使用經(jīng)過高壓滅菌或消毒過的過濾器來完成。另外，也可以選擇使用幾種溶液來涵蓋實(shí)際過濾溶液的pH、離子強(qiáng)度或有機(jī)成分的含量等特性。有些情況下可能需使用替代溶液進(jìn)行試驗(yàn)，例如，產(chǎn)品會干擾分析方法或產(chǎn)品有抑菌性等。析出物數(shù)據(jù)可從過濾器生產(chǎn)商處獲得，也可以由過濾器使用者進(jìn)行試驗(yàn)取得。有機(jī)溶液的過濾產(chǎn)生的釋放物可能比水溶液過濾要更高。潛在的析出物或釋放物的來源包括但不限于：膜組件（如：成形劑、表面活性劑、抗氧化劑、殘留溶劑、支架層）和塑料組件（如：封蓋、外殼、支架、O型圈）。析出物指在人為或挑戰(zhàn)性條件（如溶劑、溫度或時間）下，從某一材料中脫離的任何化學(xué)組分。需要關(guān)注的是，過濾器的重復(fù)使用通常是不被推薦的。如果調(diào)查確認(rèn)測試用微生物能穿透完整性檢測達(dá)標(biāo)的過濾器，那么就應(yīng)重新考慮此種過濾器在這些工作條件下的適用性。（3）微生物截留驗(yàn)證研究中使用的過濾膜的物理完整性檢測數(shù)值應(yīng)包括在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中。微生物截留驗(yàn)證研究應(yīng)包括多個批次的濾膜（通常三個批次）。在設(shè)計(jì)挑戰(zhàn)試驗(yàn)條件時過濾器的使用者應(yīng)該確認(rèn)哪個參數(shù)與特定工藝的相關(guān)性更高，以便為微生物截留試驗(yàn)條件的確定提供依據(jù)。微生物截留試驗(yàn)過程中的壓差應(yīng)達(dá)到或超過實(shí)際生產(chǎn)過程的最大壓差和/或最大流速（在過濾器制造商的設(shè)計(jì)規(guī)范內(nèi)）。在完整的生產(chǎn)時間進(jìn)行微生物截留試驗(yàn)可以對那些與時間有關(guān)的因素進(jìn)行評估，如過濾器兼容性，完整性的維持，時間依賴性的穿透等。根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件，考慮確定微生物截留試驗(yàn)的過濾時間及溫度、壓差、流速等。（2）微生物截留試驗(yàn)條件通常情況下，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下生長的缺陷性假單胞菌，在高挑戰(zhàn)濃度（如≧107）時。如果使用其他細(xì)菌，應(yīng)保證該細(xì)菌足夠細(xì)小至足以挑戰(zhàn)除菌級別濾器的截留性能，并能模擬產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的最小微生物。通常采用缺陷性假單胞菌作為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用菌。過濾器的微生物截留驗(yàn)證的設(shè)計(jì)：過濾器的微生物截留驗(yàn)證的目的：除菌過濾器微生物截留試驗(yàn)是通過模擬實(shí)際過濾工藝，過濾含有一定量生物指示菌的溶液，確認(rèn)除菌過濾器的微生物截留能力。除菌過濾系統(tǒng)的驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)是零污染，應(yīng)當(dāng)符合以下要求：培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量應(yīng)當(dāng)足以保證評價(jià)的有效性，批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量應(yīng)當(dāng)至少等于產(chǎn)品的批量?？傊?，在試驗(yàn)計(jì)劃中，總體研究設(shè)計(jì)和運(yùn)行時間應(yīng)該模擬可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差操作條件，覆蓋所有實(shí)際生產(chǎn)過程涉及的操作。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)當(dāng)包括所有對無菌結(jié)果有影響的關(guān)鍵操作，包括生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差條件，各種干預(yù)和最差條件的考慮需要體現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)控制的理念。同時，還應(yīng)模擬一些可能造成污染的操作步驟，如抽真空，充氮等步驟。應(yīng)當(dāng)注意有足夠數(shù)量的培養(yǎng)基與容器的內(nèi)表面充分接觸，灌裝培養(yǎng)基時，每個容器的灌裝體積一般為1/31/2之間，最多不能超過容器的85%。某些特殊情況下，如膠塞具有抑菌性，則需要考慮更換采用其他相當(dāng)?shù)牡珶o抑菌性的膠塞。培養(yǎng)基