第十六章基因工程和蛋白質(zhì)工程簡介-資料下載頁
2025-08-01 13:26本頁面
【正文】 因文庫中的概率，要求其大于 99%； 1/n ? 每一種 低豐度的 mRNA占總 mRNA的分?jǐn)?shù)。 基因文庫和 cDNA文庫的建立 組織 可克隆之 DNA 載體 DNA cDNA mRNA 部分或完全酶解 DNA DNA長度分級 甲基化，雙鏈接頭 DNA DNA與載體連接 引入大腸桿菌 鑒定文庫的滴度和特性 擴(kuò)增后供長期儲存 篩選出所需要的克隆 噬菌體為載體的基因文庫的構(gòu)建 四、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR） 1985年 Mullis發(fā)明 PCR（ polymerase chain reaction） 快速擴(kuò)增DNA的方法。該法模仿體內(nèi) DNA的復(fù)制過程，首先使 DNA變性，兩條鏈解開，然后使引物模板退火，二者堿基配對， DNA聚合酶隨即以4種 dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的 DNA新鏈。重復(fù)此過程， DNA以指數(shù)方式擴(kuò)增。擴(kuò)增的公式為 : Y=(1+X)n 式中 y一產(chǎn)量 。 X擴(kuò)增效率 。 n一循環(huán)次數(shù)。 （ 2） PCR的應(yīng)用 （ 1） PCR的原理 PCR技術(shù) 原理 示意圖 靶序列 變性和引物復(fù)姓 循環(huán) 1 循環(huán) 2 循環(huán) 3 變性和引物復(fù)姓 鏈延伸 Tag酶 鏈延伸 PCR技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用 ?用于合成特異探針； ?用于 DNA的測序； ? 將逆轉(zhuǎn)錄與 PCR相偶聯(lián) （ RTPCR）； ?用于基因定位誘變； ?末知序列的 PCR擴(kuò)增； ?基因組序列的比較研究； ?用于臨床診斷。 DNA芯片 (DNA chip)技術(shù)是采用寡核苷酸原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計的 DNA探針片段有序地固化于支持物表面上，產(chǎn)生二維 DNA探針陣列，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，反應(yīng)結(jié)果通過檢測雜交信號的方法（同位素法、化學(xué)熒光法、化學(xué)發(fā)光法或酶標(biāo)法）顯示，再用精密的掃描儀或 CCD攝象技術(shù)記錄，通過計算機(jī)軟件分析，綜合成可讀的 IC總信息，來實(shí)現(xiàn)對生物樣品的快速、并行、高效地檢測或診斷。 芯片分析實(shí)際上也是傳感器分析的組合。芯片陣列中的每一個單元微點(diǎn)都是一個傳感器的探頭，所以傳感器技術(shù)的精髓往往都被用于芯片的發(fā)展。陣列檢測可以大大提高檢測效率，減少工作量，增加可比性，所以芯片技術(shù)也是傳感器技術(shù)的發(fā)展。 DNA芯片技術(shù)簡介 DVA芯片工作示意圖 emission Laser 1 Laser 2 puter analysis DNA clones test reverse transcription Label with fluor dyes PCR amplification purfication hybridize target to microarray robotic printing reference
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