第二章核酸化學(xué)-資料下載頁
2025-08-01 13:04本頁面
【正文】 雜交 （緩慢冷卻） 復(fù)性 （緩慢冷卻） 變性 ： 在物理 、 化學(xué)因素影響下 ， DNA堿基對(duì)間的氫鍵斷裂 ， 雙螺旋解開， 這是一個(gè)是躍變 過 程 ， 伴有A260增加 （ 增色效應(yīng) ） , DNA的功能喪失 。 復(fù)性 ：在一定條件下 ， 變性DNA 單鏈間堿基重新配對(duì)恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu) ， 伴有 A260減小 （ 減色效應(yīng) ） , DNA的功能恢復(fù) 。 Southern印跡法 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 瓊脂糖電泳 轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上 與放射性標(biāo)記DNA探針雜交 放射自顯影 帶有 DNA片段的凝膠 凝膠 濾膜 用緩沖液轉(zhuǎn)移 DNA 吸附有 DNA片段的膜 分子雜交的原理示意圖 不 同 來 源 的DNA單鏈間或單鏈 DNA與 RNA之間只要有堿基配對(duì)的區(qū)域 ， 在復(fù)性時(shí)可形成局部雙螺旋區(qū) ， 稱核酸 分 子 雜 交 （hybridization）制備特定的探針（ probe） 通過雜交技術(shù)可進(jìn)行基因的檢測和定位研究 。 實(shí)例：southern印跡法 Tm： 熔解溫度（ melting temperature） Poly d(AT) DNA Poly d(GC) DNA的變性發(fā)生在一個(gè)很窄的溫度范圍內(nèi) ， 通常把熱變性過程中 A260達(dá)到最大值一半時(shí)的溫度稱為該DNA的熔解溫度 ， 用Tm表示 。 Tm的 大小與 DNA分子中 （ G+C） 的百分含量成正相關(guān) ， 測定 Tm值可推算核酸堿基組成及判斷 DNA純度 。 某些 DNA的 Tm值 60 80 100 1 .0 1 .4 1 .2 100% A260 t \ 0C Tm Tm Tm 1 2 3 1 2 3 人類基因組計(jì)劃概況 （ Human Genome Project， HGP） 該計(jì)劃是美國科學(xué)家在 1985年率先提出， 1990年正式啟動(dòng)。美、英、德、法、日先后參加了此項(xiàng)工作，1999年我國成為 HGP的第六個(gè)成員國。 HGP旨在闡明人類基因組 DNA所具有的 3 109核苷酸的序列，發(fā)現(xiàn)所有的人類基因并闡明其在染色體上的位置，破譯人類的全部遺傳信息，使得人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識(shí)自我。 到目前為止，已完成了人類基因組的框架圖，測序的工作已基本完成。 HGP的實(shí)施，揭開了生命科學(xué)新的一頁，它可以造福于人類，但也面臨的倫理的挑戰(zhàn)。 HGP取得的成就 ? 完成了人類基因組工作草圖繪制 ,揭示了人類基因組若干細(xì)節(jié) ? 基本上測定了人類基因組上的堿基序列 ? 一些模式生物 (果蠅、擬南介等 )和作物（如水稻）基因草圖繪制成功，測序基本完成 ? 促進(jìn)了生物信息學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、糖組學(xué)的迅猛發(fā)展 ? 人類基因組草圖繪就，中國科學(xué)家功不可沒 HGP面臨的挑戰(zhàn) ? 基因的隱私權(quán)問題 ? 基因組圖譜和信息的使用與人的社會(huì)權(quán)利問題 ? 基因資源問題 ? 基因知識(shí)的濫用問題 人類將進(jìn)入生物經(jīng)濟(jì)時(shí)代 基因 ——操縱生命的工具 基因組 ——潛藏著巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值 基因技術(shù) ——21世紀(jì)的投資熱點(diǎn) 誰掌握了人類基因圖譜，就等于誰破譯了人類的生命密碼，獲得了操縱生命的工具。 與互聯(lián)網(wǎng)相比，網(wǎng)絡(luò)只是對(duì)人類的信息溝通帶來了巨大的革命，而基因領(lǐng)域的革命則能夠從根本上改變?nèi)祟惖拿\(yùn)，基因工程所帶來的商業(yè)機(jī)會(huì)將會(huì)大大超過網(wǎng)絡(luò)。 離心機(jī)結(jié)構(gòu)示意圖 轉(zhuǎn)頭 轉(zhuǎn)頭腔 沉降樣品 驅(qū)動(dòng)馬達(dá) 真空 冷凍 沉降系數(shù) （ sedimentation coefficient） 生物大分子在單位離心力場作用下的沉降速度稱為沉降系數(shù) 。 即沉降系數(shù)是微顆粒在離心力場的作用下 ， 從靜止?fàn)顟B(tài)到達(dá)極限速度所需要的時(shí)間 。 數(shù)學(xué)定義式為： 沉降系數(shù)單位 ：由于蛋白質(zhì)、核酸、病毒等的沉降系數(shù)介于 1 1013到 200 1013秒的范圍，為方便起見，把作為沉降系數(shù)的一個(gè)單位，用Svedberg單位，用即 S表示。 沉降系數(shù)（ s） 與相對(duì)分子量（ Mr） 的關(guān)系 : Mr = RTs D(1??) Svedberg方程 : d? /dt ?2 ? s = 問答題 某 DNA樣品含腺嘌呤 %（ 按摩爾堿基計(jì) ） ， 計(jì)算其余堿基的百分含量 。 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是什么時(shí)候 ， 由誰提出來的 ？ 試述其結(jié)構(gòu)模型 。 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)有些什么基本特點(diǎn) ？ 這些特點(diǎn)能解釋哪些最重要的生命現(xiàn)象 ？ tRNA的結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn) ？ 有何功能 ？ DNA和 RNA的結(jié)構(gòu)有何異同 ？ 簡述核酸研究的進(jìn)展 ， 在生命科學(xué)中有何重大意義 ？ 計(jì)算 （ 1） 分子量為 3?105的雙股 DNA分子的長度； （ 2） 這種 DNA一分子占有的體積； （ 3） 這種 DNA一分子占有的螺旋圈數(shù) 。 （ 一個(gè)互補(bǔ)的脫氧核苷酸殘基對(duì)的平均分子量為 618） 名詞解釋 變性和復(fù)姓 分子雜交 增色效應(yīng)和減色效應(yīng) 回文結(jié)構(gòu) Tm cAMP Chargaff定律
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