【正文】 在生產(chǎn)液體菌種的深層發(fā)酵工藝中，需要大量無(wú)菌空氣，采用氣體過(guò)濾方法，使空氣通過(guò)多層棉花和活，哇炭，濾除空氣中的微生物?，F(xiàn)許多發(fā)酵工業(yè)的廠家，已逐步采用超細(xì)玻璃纖維代替棉花和活性炭，其優(yōu)點(diǎn)是體積小，使用方便，節(jié)省材料，但超細(xì)纖維濾紙不能受潮 化學(xué)方法　化學(xué)方法是用化學(xué)藥品來(lái)殺滅或抑制雜菌的生長(zhǎng)與繁殖。用于殺滅雜菌的藥物稱(chēng)為消毒劑。消毒劑主要用于體表、器械和環(huán)境的消毒。理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強(qiáng)、價(jià)格低、能長(zhǎng)期保存、無(wú)腐蝕性、對(duì)人無(wú)毒或毒性較小的化學(xué)藥品。 ①使用方法要使消毒劑充分發(fā)揮殺菌效力，必須使化學(xué)藥品成為氣態(tài)或液態(tài)，才能獲得消毒物品的最大接觸面積。 (1)氣態(tài)消毒法用加熱、焚燒、氧化等方法，使化學(xué)藥劑為氣體狀態(tài)擴(kuò)散到空中，殺死空氣和物體表面的微生物。這種方法簡(jiǎn)便，只需把要消毒的空間關(guān)閉緊密即可。另一種方法是把要消毒的物品放在特殊的密閉容器中，先抽凈物品孔隙里的空氣，再通入殺菌氣體。這種方法殺菌徹底，且毒氣不易外溢，但必須有一定的設(shè)備，如真空熏蒸消毒機(jī)等。一般用于劇毒藥劑熏蒸和某些不耐熱物品的徹底消毒滅菌。 (2)液態(tài)消毒法是將消毒劑按一定的比例直接投入待消毒滅菌的溶液中，或先配制成一定濃度的藥液，然后根據(jù)不同情況采用噴霧、擦拭、浸泡、涂抹或加入培養(yǎng)基等方法進(jìn)行消毒或滅菌。 ②影響消毒劑作用的因素 不同的消毒劑其殺菌或抑菌不同。有的能使雜菌的蛋白質(zhì)變性，有的可與雜菌的酶系統(tǒng)相結(jié)合而影響其代謝，有的則能降低細(xì)菌的表面張力，增加菌體細(xì)胞膜的通透性，使細(xì)胞破裂或溶解。影響消毒劑上述作用的主要因素有以下幾種。 (1)環(huán)境條件的影響消毒劑作用的溫度和時(shí)間，對(duì)殺菌力的影響最為顯著。一般講，溫度越高，殺菌效果越好，作用的時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌效果越好。此外，環(huán)境中如果存在著蛋白質(zhì)等有機(jī)物，由于化學(xué)消毒劑與蛋白質(zhì)的結(jié)合而引起消耗，而大大減弱消毒劑的效果。 (2)消毒劑的性質(zhì)與濃度消毒劑的化學(xué)性質(zhì)決定其殺菌力，它必須溶解于水，方可滲入微生物體內(nèi)而發(fā)揮作用。如升汞在水中解離度大，因而殺菌力也大。消毒劑的濃度也直接影響它的殺菌力，一般消毒劑的濃度越大，其殺菌力越強(qiáng)。但石炭酸和酒精濃度過(guò)高，反而不能達(dá)到殺菌的目的。 (3)微生物的種類(lèi)與芽孢不同微生物對(duì)各種消毒劑的敏感度不同，這主要是與其細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有關(guān)。因此，某一種化學(xué)消毒劑，對(duì)某一種微生物的消毒力，必須分別加以衡量，以便對(duì)癥下藥。此外，細(xì)菌的芽孢，對(duì)同一或不同化學(xué)藥品的抵抗力，比其營(yíng)養(yǎng)體大得多。所以，要達(dá)到徹底消毒的目的，切勿泛用化學(xué)消毒劑。 ③化學(xué)消毒劑的配制 (1)百分比濃度的計(jì)算配制消毒劑時(shí)常用到百分比濃度。它的計(jì)算公式是：　　　　　　　　　　 溶質(zhì)質(zhì)量 溶液百分比濃度＝ x100% 溶質(zhì)質(zhì)量＋溶劑質(zhì)量溶質(zhì)指被溶解的物質(zhì)；溶劑指能溶解溶質(zhì)的物質(zhì)，水是最常用的溶劑；質(zhì)量指重量，水的質(zhì)量一般以1g／ml計(jì)算。 (2)溶液稀釋的計(jì)算由百分比濃度大的溶液配制成百分比濃度小的溶液，可用下面方法簡(jiǎn)便計(jì)算： A D ↘↙ C ↗↖ B E A為濃溶液的百分比數(shù)值；B為稀溶液的百分比數(shù)值(如果用水稀釋則為0)；C為欲配制的百分濃度；D為配制時(shí)需要的濃溶液數(shù)量(D＝C—B)；E為需要的稀釋液數(shù)量(E＝A—C)。 例如：欲將95%的酒精配制成75%的酒精，按此方法計(jì)算，用75份濃酒精加入20份水，即為75%的酒精。 95% 75=(75—0) ↘ ↙ 75% ↗↖ 0% 20=(95—75)接種室與接種箱的消毒滅菌 主要介紹紫外線照射、福爾馬林熏蒸和石炭酸噴霧三種方法。 ①紫外線照射在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一并移入接種室(箱)內(nèi)，然后打開(kāi)紫外線燈進(jìn)行滅菌。如果接種室的體積較大，開(kāi)燈照射要達(dá)2h才能收到滅菌效果；如果接種箱的體積較小，則開(kāi)燈只需半h左右即可達(dá)到滅菌效果。使用時(shí)應(yīng)注意，當(dāng)細(xì)菌接受致死量紫外線照射后，隨即給予可見(jiàn)光照射，其中有一部分細(xì)菌又有可能復(fù)活(稱(chēng)光復(fù)活現(xiàn)象)。為此，經(jīng)紫外線消毒后的空間，最好掛上黑窗簾(接種箱罩黑布)遮光半h，以提高殺菌效果。照射時(shí)工作人員要離開(kāi)室內(nèi)(避免肉眼觀看紫外線燈)，以防輻射影響身體健康。 紫外線消毒的優(yōu)點(diǎn)是：使用方便，對(duì)多數(shù)物品無(wú)損害；消毒時(shí)不必專(zhuān)人看管，并可作為永久性設(shè)備。其缺點(diǎn)是：對(duì)真菌殺傷力差，穿透能力弱。 表23 常用化學(xué)消毒劑的使用名稱(chēng)用途使用方法注意事項(xiàng)福爾馬林（含甲醛37%～40%）接種室、接種箱、培養(yǎng)室空間消毒或物體表面殺菌①熏蒸法：房間關(guān)閉緊密，按6～8ml/m3的用量將福爾馬林置碗內(nèi)，加5g高錳酸鉀氧化揮發(fā)，或直接加熱蒸發(fā)至干。②噴霧法：按1：50的比例配成水溶液噴射在物體上①福爾馬林有白色沉淀時(shí)，可加幾滴硫酸溶液②熏蒸法房間必要預(yù)先噴濕③對(duì)眼睛刺激性強(qiáng)，應(yīng)注意防護(hù)硫磺接種室、接種箱、培養(yǎng)室空間消毒或物體表面殺菌熏蒸法：按15g/m3的用量置磁碗內(nèi)，用紙片引火點(diǎn)燃。房間同樣需密閉。①熏蒸前噴灑水霧，以增加殺菌效果②注意防止金屬品銹蝕乙醇（酒精）皮膚、器皿、分離材料的表面消毒配成70%～75%的溶液擦拭易燃，使用時(shí)注意安全苯酚（石炭酸）接種室、接種箱空間消毒及物體表面殺菌①配成5%溶液在空間或物體表面上噴霧②3%溶液用于器械浸泡對(duì)皮膚有腐蝕作用來(lái)蘇兒（含煤酚皂47%～53%）手及物體表面消毒①3%溶液浸泡器皿1h②1%～2%溶液擦洗接種箱、無(wú)菌室、用具以及手的浸泡漂白粉床架、地板、墻壁、用具等的消毒配成2%～5%水溶液洗刷殺菌效力持續(xù)時(shí)間短，應(yīng)隨配隨用高錳酸鉀床架、器皿等表面消毒%～%水溶液刷洗或浸泡隨配隨用新潔爾滅（含季胺鹽5%）皮膚和不耐熱物品的表面消毒%的水溶液刷洗或浸泡升汞分離材料、非金屬物品的表面殺菌%～%水溶液刷洗或浸泡①配制時(shí)，升汞先溶于濃鹽酸（）再用水稀釋②劇毒，使用時(shí)注意安全冰醋酸（冰乙酸）空間消毒、非金屬物品的表面殺菌①?lài)婌F：%，空間5ml～8ml/m3。②熏蒸：密閉門(mén)窗，加熱30分鐘易被堿性物質(zhì)中和失效②福爾馬林熏蒸每立方m空間一般要用8mL福爾馬林原液(市售含甲醛40%的水溶液)，高錳酸鉀5g。先密閉門(mén)窗，量取相應(yīng)的福爾馬林置于容器中，然后加入相應(yīng)的高錳酸鉀，操作者隨即離開(kāi)接種室，熏蒸50分鐘即能達(dá)到消毒滅菌的目的。也可直接加熱福爾馬林原液，使其蒸發(fā)進(jìn)行熏蒸。無(wú)論哪一種方法熏蒸，都應(yīng)隔天才能接種。 福爾馬林熏蒸的優(yōu)點(diǎn)是：殺菌力強(qiáng)，殺菌普廣，性質(zhì)穩(wěn)定，耐貯存，受有機(jī)物影響小。缺點(diǎn)是：有一定的毒性和刺激氣味，且受溫度影響大。 ③石炭酸噴霧工作之前，先用2%石炭酸溶液浸濕揩布，將接種室(箱)門(mén)窗、桌、凳及地面擦拭一遍，再用5%石炭酸溶液進(jìn)行噴霧，以促使空氣中的微粒和雜菌附著沉降，防止微塵飛揚(yáng)，同時(shí)也起殺菌作用。 石炭酸噴霧的優(yōu)點(diǎn)是：操作簡(jiǎn)易、性質(zhì)穩(wěn)定。缺點(diǎn)是：對(duì)皮膚有一定刺激性，只能作消毒劑。 接種箱較小，%的升汞溶液進(jìn)行噴霧，達(dá)到消毒滅菌。升汞劇毒，使用時(shí)應(yīng)注意安全。接種室和接種箱的操作規(guī)程 要想達(dá)到無(wú)菌操作的目的，必須嚴(yán)格在接種室和接種箱的操作規(guī)程。 ①接種室的使用規(guī)程 (1)在每次使用前半h，把所需要的器材搬入緩沖室，在接種室和緩沖室用5%石炭酸溶液噴霧后，開(kāi)啟紫外線燈照射半h。 (2)進(jìn)入緩沖室，穿上無(wú)菌工作服、鞋、戴好口罩、工作帽，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。 (3)將所需物品移入接種室，按一定位置擺好，檢查是否齊全，并用5%石炭酸溶液重點(diǎn)在工作臺(tái)的上方和附近的地面上噴霧，然后退回緩沖室，待幾分鐘后再進(jìn)入接種室工作。 (4)接種前，用70%的酒精棉球擦手，然后按常規(guī)在火焰上進(jìn)行各項(xiàng)操作。操作時(shí)動(dòng)作要輕捷，盡量減少空氣波動(dòng)，兩人操作時(shí)要配合默契。用畢的火柴桿，廢紙不要扔在地上，應(yīng)放在專(zhuān)用的瓷盆里。 (5)工作結(jié)束，及時(shí)取出接種材料，然后清理臺(tái)面，將廢物拿出室外，再用5%石炭酸全面噴灑，或打開(kāi)紫外線燈照射半h。 (6)接種時(shí)如遇棉塞著火，用手緊握即可熄滅，或用濕布撲滅，切勿用嘴吹滅，以免擴(kuò)大火焰。如遇培養(yǎng)物或有菌容器打碎散落，應(yīng)及時(shí)用揩布沾上5%的石炭酸溶液，收拾擦拭，再用酒精棉球擦手后才可繼續(xù)操作。 ②接種箱的使用規(guī)程 (1)每次接種前用5%石炭酸在接種箱內(nèi)壁和空間噴霧。 (2)用肥皂洗手后搬進(jìn)接種物品，關(guān)閉箱門(mén)，開(kāi)啟紫外線殺菌燈照射20～30分鐘。 (3)用70%酒精棉球擦手，然后伸進(jìn)接種箱內(nèi)操作。 (4)操作完畢要及時(shí)清掃掉落在箱內(nèi)的培養(yǎng)物和火柴梗、棉球等雜物，并用2%來(lái)蘇兒擦拭，再用5%石炭酸全面噴霧后關(guān)閉。 玻璃器皿的洗滌與滅菌 為了保證制種工作的順利進(jìn)行，提高制種成品率，應(yīng)首先對(duì)玻璃器皿進(jìn)行嚴(yán)格的洗滌和滅菌。 ①洗滌時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)與方法 (1)洗滌玻璃器皿不能使用對(duì)其有腐蝕作用的化學(xué)藥品，也不能使用比其硬度大的物品來(lái)擦拭，以免損傷玻璃器皿。 (2)新的玻璃器皿因附有游離堿，不能直接使用，應(yīng)先在1%～2%的鹽酸溶液中浸泡10個(gè)h，再用清水沖洗干凈備用。 (3)對(duì)用過(guò)的器皿應(yīng)立即洗滌，久置會(huì)增加洗滌的困難。洗滌時(shí)要分類(lèi)進(jìn)行，以免浪費(fèi)洗滌藥劑和洗滌時(shí)間；對(duì)附有瓊脂培養(yǎng)基的器皿，應(yīng)先用水蒸煮融化后趁熱倒出，再用清水洗滌；對(duì)沾有蠟的器皿，應(yīng)先加熱使之融化后擦掉，再用清水沖洗干凈；對(duì)沾有焦油、樹(shù)脂的器皿，可用40%氫氧化鈉溶液洗滌。 (4)對(duì)清潔度要求較高的玻璃器皿，除用以上方法刷洗外，還應(yīng)在洗滌液中浸泡數(shù)h，用竹夾子取出(切勿用手取)，自來(lái)水沖洗干凈，直至四壁能被水均勻濕潤(rùn)而無(wú)水珠時(shí)，說(shuō)明油污已被除凈，再用蒸餾水沖2～3次，即可烘干備用。 ②玻璃器皿的滅菌 玻璃器皿一般采用干熱滅菌，若用高壓蒸汽滅菌，滅菌后則要經(jīng)過(guò)干燥才能使用。具體的滅菌方法前已述及，這里主要介紹常用玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備工作。 (1)培養(yǎng)皿 洗凈后烘干或晾干，然后按每5～7套用牛皮紙或報(bào)紙包好，也可裝在大飯盒或特制的盒內(nèi)，即可滅菌。 (2)試管和三角瓶 洗凈后烘干或晾干，滅菌前要在管口和瓶口加上棉塞，再用報(bào)紙包好。試管也可若干支扎在一起，棉塞外再包一層報(bào)紙。 (3)移液管和滴管 洗凈后烘干或晾干，在口吸的一端用尖頭鑷子或針塞入少許脫脂棉花，以防菌體吸入口中而進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染。塞好后用酒精燈火焰將露在管口外的棉花燒掉，然后用4cm～5cm寬的報(bào)紙條，以45度角螺旋形將每根移液管分別卷好，兩端不可外露，再根據(jù)需要將若干支扎成一束，即可滅菌。使用時(shí)可從移液管中間擰斷紙條抽取。滴管滅菌前的包裝與移液管相同。 如果采用高壓蒸汽鍋滅菌，滅菌結(jié)束停止加熱后，要立即排盡蒸汽，打開(kāi)鍋蓋，再將鍋內(nèi)剩余的水排出，然后利用鍋內(nèi)的余熱將器皿烘干。 消毒與滅菌的效果，直接影響菌種成品率的高低。因此不但要把好消毒滅菌關(guān)，而且還要嚴(yán)格執(zhí)行檢驗(yàn)制度。 培養(yǎng)基滅菌效果的檢查 每采用一種新的培養(yǎng)基，或使用一種新的滅菌設(shè)備，以及變更滅菌的壓力和時(shí)間，都必須進(jìn)行滅菌效果的檢驗(yàn)。具體方法是：把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置，每處抽取數(shù)管(瓶)，標(biāo)上記號(hào)，置25℃～30℃培養(yǎng)一周左右進(jìn)行檢查。如果培養(yǎng)基沒(méi)有什么變化，說(shuō)明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進(jìn)行改進(jìn)；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說(shuō)明滅菌溫度或滅菌時(shí)間不夠，應(yīng)提高壓力或延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。經(jīng)過(guò)幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不必進(jìn)行檢查。 接種室(箱)消毒滅菌效果的檢驗(yàn) ①檢查方法常用的檢查方法有平板法和斜面法兩種 (1)平板法用常規(guī)培養(yǎng)基如肉湯瓊脂，馬鈴薯葡萄糖瓊脂等，分別倒成平板，每種兩個(gè)，放入接種室或接種箱。檢驗(yàn)時(shí)，按無(wú)菌操作各將其中一個(gè)平板的蓋子打開(kāi)，經(jīng)過(guò)預(yù)定時(shí)間再蓋好；另外一個(gè)不開(kāi)蓋子作為對(duì)照。然后一起放在30℃下培養(yǎng)48h后檢查有無(wú)菌落出現(xiàn)。 (2)斜面法將以上的常規(guī)培養(yǎng)基斜面各取2管，放入接種室或接種箱。按無(wú)菌操作各將其中一管棉塞打開(kāi)，把棉塞放入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間再將棉塞塞好，連同對(duì)照一起放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度和時(shí)間同前。 ②檢驗(yàn)內(nèi)容 (1)空氣熏蒸效果檢驗(yàn)接