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熒光探針定量pcr技術(shù)原理及應(yīng)用-資料下載頁

2025-07-31 00:28本頁面
  

【正文】 要由性接觸傳播,新生兒可在通過產(chǎn)道時受感染。HPV的病毒感染僅停留于局部皮膚和黏膜中,不產(chǎn)生病毒血癥?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)HPV有100多個型,不同型的HPV侵犯的部位和所致疾病也不相同。其中HPV11型可引起尖銳濕疣、喉乳頭瘤等良性病變,稱為低危型HPV,而HPV1133等型別與宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤等惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān),稱高危型HPV。宮頸癌是女性最常見惡性腫瘤之一,也是目前唯一發(fā)病原因清楚的腫瘤,HPV感染是宮頸癌的主要致病原因之一,根據(jù)美國2001年癌癥統(tǒng)計學(xué)資料,2000年全美約有12900例新發(fā)病人,死亡約4400例。我國每年新發(fā)宮頸癌病例約計13萬,占全世界宮頸癌新發(fā)病例的28%。因此,宮頸癌的病因與其發(fā)病機(jī)制的研究受到國內(nèi)外學(xué)者的高度重視。宮頸癌的致病因素是很復(fù)雜的,是多種因素作用的結(jié)果。許多研究表明,HPV是宮頸癌的致癌主要因素,但HPV感染并非唯一的致癌因素,HSV以及HCMV等也與宮頸癌存在密切關(guān)系。二 熒光探針PCR檢HPVDNA的意義 (一)高危型HPV感染與宮頸癌關(guān)系密切,98%宮頸癌患者可以檢出HPV。常規(guī)的組織學(xué)與細(xì)胞學(xué)方法只能對臨床和病理表現(xiàn)典型的病例做出診斷,新發(fā)展的薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)采用超薄涂片技術(shù),背景干凈清晰,有利于明確診斷,但這歸根結(jié)底是從細(xì)胞學(xué)水平來觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,其中80%的患者確診時已是宮頸癌晚期。(二)熒光探針定量PCR方法直接檢測HPVDNA,比核酸分子雜交技術(shù)更具敏感性、特異性,快速、準(zhǔn)確。該方法簡便,能達(dá)到較為理想的結(jié)果,大大提高了HPV的檢測水平,是宮頸癌預(yù)防、診治的突破性進(jìn)展。(三)熒光探針定量PCR可以準(zhǔn)確判斷體內(nèi)HPV的感染,不僅可以對組織病理改變典型的病例做出診斷,對不典型鱗狀上皮細(xì)胞增生的患者同樣可以做出診斷,同時還可以對亞臨床和隱性HPV感染做出診斷。HPVDNA是美國FDA規(guī)定的婦女宮頸癌篩查的必檢項目。(四)可對其進(jìn)行分型(高危型HPV118型和低危型HPV11型)。(五)可以估計病毒載量與患癌癥風(fēng)險,有報道顯示,持續(xù)性HPVDNA高病毒載量的婦女患宮頸癌的相關(guān)風(fēng)險是HPVDNA陰性婦女的30倍。(六)可以考核療效與預(yù)后。HPVDNA載量的下降水平或消失可以判斷治療是否有效,其DNA水平的高低也是估計預(yù)后的一個重要指標(biāo)。感染性疾病的熒光探針定量PCR檢測和診斷,其方法學(xué)的依據(jù)是基于直接檢測和擴(kuò)增病原體的遺傳物質(zhì)核酸(DNA或RNA),是“現(xiàn)癥感染”的最直接和最客觀的依據(jù),這也是它與免疫學(xué)方法的根本區(qū)別,所以標(biāo)本的正確留取尤為重要,一定要對病原體感染和存在的相應(yīng)部位進(jìn)行正確取材,才能提高檢測的陽性率和準(zhǔn)確率。比如肺部結(jié)核桿菌的感染,一定要取深部的痰液或肺泡灌洗液。如果只是簡單地取咽拭子,其陽性率就會大大降低。血液標(biāo)本結(jié)核桿菌的陽性,只有在結(jié)核桿菌擴(kuò)散入血,形成播散性結(jié)核時才會出現(xiàn)。 核酸種類 病原體 檢測標(biāo)本 DNA類 乙型肝炎病毒(HBV) 血清、血漿等 DNA類 結(jié)核桿菌(TB) 深部痰液、肺炎支氣管炎灌洗液、腦脊液、尿液、血液等DNA類 淋球菌(NGH) 生殖、泌尿道分泌物DNA類 沙眼衣原體(CT) 生殖、泌尿道系統(tǒng)DNA類 解脲脲原體(UU) 生殖、泌尿道系統(tǒng)DNA類 人乳頭瘤病毒6,11型(HPV6,11) 生殖泌尿道分泌物、生殖道刮片、組織活檢標(biāo)本等 DNA類 人乳頭瘤病毒16,18型(HPV16,18) 生殖泌尿道分泌物、生殖道刮片、組織活檢標(biāo)本等 DNA類 單純皰疹病毒通用型(HSV) 生殖泌尿道分泌物、尿道口或患病部分刮片、皰診液等 DNA類 單純皰疹病毒II型(HSV) 生殖泌尿道分泌物、尿道口或患病部分刮片、皰診液等 DNA類 弓形蟲(TOX) 全血、羊水、絨毛膜等 DNA類 巨細(xì)胞病毒(HCMV)尿液、乳汁、血清或全血等 DNA類 梅毒螺旋體(TP) 梅毒疹、潰瘍部位等刺液或刮片、血液、腦脊液等 DNA類 幽門螺旋菌(HP) 胃液、胃粘膜組織、唾液等 DNA類 肺炎支原體(MP) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 DNA類 EB病毒(EBV) 咽拭子、組織、淋巴液、血清或全血等 DNA類 肺炎衣原體(CP) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 DNA類 腺病毒(ADV) 咽拭子、呼吸道分泌物、糞便 DNA類 嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP) 痰液、肺活檢組織 DNA類 丙型肝炎病毒(HCV) 血清、血漿等 DNA類 甲型肝炎病毒(HAV) 血清、血漿等 RNA類戊型肝炎病毒(HEV) 血清、血漿等 RNA類 庚型肝炎病毒(HBV) 血清、血漿等 RNA類 柯薩奇病毒(CBV) 血清、血漿等 RNA類 風(fēng)疹病毒(RV) 血清、血漿等 RNA類 解脲脲原體(UU) 血清、血漿等 RNA類 多藥耐藥基因(MDR1) 抗凝血、組織 RNA類 BcrAb1融合基因 抗凝血、骨髓標(biāo)本 RNA類 雌激素受體(ER) 組織 RNA類 人類免疫缺陷病毒1型(HIV1) 血清、血漿等 DNA類 大腸桿菌(EHECO157) 糞便、嘔吐物、可疑水樣和食物等 DNA類 霍亂弧菌 糞便、嘔吐物、可疑水樣和食物 DNA類 炭疽桿菌(BA) 血液,鼻、表皮拭子,糞便與嘔吐物,毛皮或其他可疑污染物品等 RNA類 呼吸道合胞病毒(RSV) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 RNA類 新型冠狀病毒(SARS) 漱口液 RNA類 各型流感病毒 咽拭子、呼吸道分泌物 RNA類 EV/EV71/CA16 咽拭子、糞便 RNA類 超級細(xì)菌NDM1 傷口分泌物、尿液、糞便 RNA類 EV70/CA24V 眼部分泌物 一 熒光探針定量PCR定量檢測的意義 定量檢測與定性檢測的最大區(qū)別就在于,定性只是檢測病原體核酸的“有”或“無”,而定量可以檢測病原體核酸量的“多”或“少”。 定量檢測的意義:1. 體現(xiàn)病原體含量與復(fù)制水平、感染程度之間的關(guān)系。 2. 評價和考核治療效果。 3. 用于傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預(yù)測與預(yù)防。 4. 作為新的愈后指標(biāo)。 5. 建立新的病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn)。 6. 新的藥物及療法的研究與開發(fā)。 二 熒光定量PCR報告結(jié)果的讀?。?熒光定量PCR是直接擴(kuò)增病原體的特異性DNA或cDNA,其結(jié)果反映了標(biāo)本中DNA或RNA存在的多少,結(jié)果通常用數(shù)字表示, 報告為“copies/ml”、“2U/ml”或“copies”, copy即“拷貝”,表示病原體基因組的個數(shù),該數(shù)據(jù)越大,表明病原體在體內(nèi)復(fù)制得越厲害,傳染性越強(qiáng)。 例:HBVDNA 定量結(jié)果報告:104 IU/ml(如果采用科學(xué)記數(shù)法表示為:+04),代表每ml血液中含有36,370國際單位乙肝病毒分子。 如果待檢標(biāo)本能夠定量,如血液等,結(jié)果報告為多少copies/ml或2U/ml。 如果待檢標(biāo)本不易定量,如分泌物、痰液等,結(jié)果只報告為多少copies。PCR檢測標(biāo)本的留取感染性疾病的熒光探針定量PCR檢測和診斷,其方法學(xué)的依據(jù)是基于直接檢測和擴(kuò)增病原體的遺傳物質(zhì)核酸(DNA或RNA),是“現(xiàn)癥感染”的最直接和最客觀的依據(jù),這也是它與免疫學(xué)方法的根本區(qū)別,所以標(biāo)本的正確留取尤為重要,一定要對病原體感染和存在的相應(yīng)部位進(jìn)行正確取材,才能提高檢測的陽性率和準(zhǔn)確率。比如肺部結(jié)核桿菌的感染,一定要取深部的痰液或肺泡灌洗液。如果只是簡單地取咽拭子,其陽性率就會大大降低。血液標(biāo)本結(jié)核桿菌的陽性,只有在結(jié)核桿菌擴(kuò)散入血,形成播散性結(jié)核時才會出現(xiàn)。 核酸種類 病原體 檢測標(biāo)本 DNA類 乙型肝炎病毒(HBV) 血清、血漿等 DNA類 結(jié)核桿菌(TB) 深部痰液、肺炎支氣管炎灌洗液、腦脊液、尿液、血液等DNA類 淋球菌(NGH) 生殖、泌尿道分泌物DNA類 沙眼衣原體(CT) 生殖、泌尿道系統(tǒng)DNA類 解脲脲原體(UU) 生殖、泌尿道系統(tǒng)DNA類 人乳頭瘤病毒6,11型(HPV6,11) 生殖泌尿道分泌物、生殖道刮片、組織活檢標(biāo)本等 DNA類 人乳頭瘤病毒16,18型(HPV16,18) 生殖泌尿道分泌物、生殖道刮片、組織活檢標(biāo)本等 DNA類 單純皰疹病毒通用型(HSV) 生殖泌尿道分泌物、尿道口或患病部分刮片、皰診液等 DNA類 單純皰疹病毒II型(HSV) 生殖泌尿道分泌物、尿道口或患病部分刮片、皰診液等 DNA類 弓形蟲(TOX) 全血、羊水、絨毛膜等 DNA類 巨細(xì)胞病毒(HCMV)尿液、乳汁、血清或全血等 DNA類 梅毒螺旋體(TP) 梅毒疹、潰瘍部位等刺液或刮片、血液、腦脊液等 DNA類 幽門螺旋菌(HP) 胃液、胃粘膜組織、唾液等 DNA類 肺炎支原體(MP) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 DNA類 EB病毒(EBV) 咽拭子、組織、淋巴液、血清或全血等 DNA類 肺炎衣原體(CP) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 DNA類 腺病毒(ADV) 咽拭子、呼吸道分泌物、糞便 DNA類 嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP) 痰液、肺活檢組織 DNA類 丙型肝炎病毒(HCV) 血清、血漿等 DNA類 甲型肝炎病毒(HAV) 血清、血漿等 RNA類戊型肝炎病毒(HEV) 血清、血漿等 RNA類 庚型肝炎病毒(HBV) 血清、血漿等 RNA類 柯薩奇病毒(CBV) 血清、血漿等 RNA類 風(fēng)疹病毒(RV) 血清、血漿等 RNA類 解脲脲原體(UU) 血清、血漿等 RNA類 多藥耐藥基因(MDR1) 抗凝血、組織 RNA類 BcrAb1融合基因 抗凝血、骨髓標(biāo)本 RNA類 雌激素受體(ER) 組織 RNA類 人類免疫缺陷病毒1型(HIV1) 血清、血漿等 DNA類 大腸桿菌(EHECO157) 糞便、嘔吐物、可疑水樣和食物等 DNA類 霍亂弧菌 糞便、嘔吐物、可疑水樣和食物 DNA類 炭疽桿菌(BA) 血液,鼻、表皮拭子,糞便與嘔吐物,毛皮或其他可疑污染物品等 RNA類 呼吸道合胞病毒(RSV) 痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子等 RNA類 新型冠狀病毒(SARS) 漱口液 RNA類 各型流感病毒 咽拭子、呼吸道分泌物 RNA類 EV/EV71/CA16 咽拭子、糞便 RNA類 超級細(xì)菌NDM1 傷口分泌物、尿液、糞便 RNA類 EV70/CA24V 眼部分泌物
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