薄層色譜法的發(fā)展-資料下載頁(yè)
2025-07-27 22:01本頁(yè)面
【正文】 異較大，致使色譜結(jié)果不盡人意，分離度、重現(xiàn)性均難以達(dá)到滿意的效果。國(guó)外，尤其是歐洲國(guó)家在薄層色譜技術(shù)及相應(yīng)的儀器開發(fā)上逐步有了很大發(fā)展，20世紀(jì)90年代已經(jīng)達(dá)到單元操作計(jì)算機(jī)自動(dòng)化，高質(zhì)量商品預(yù)制薄層板常規(guī)板與高效板代替了自制薄層板，進(jìn)入一個(gè)高層次的儀器和微機(jī)化的階段。隨著技術(shù)和儀器的引進(jìn)，我國(guó)在薄層色譜技術(shù)方面迅猛發(fā)展，高效薄層板及薄層色譜儀器已普遍使用。這就要求我們將教學(xué)內(nèi)容更新和實(shí)驗(yàn)課中操作方法改進(jìn)。 高效薄層色譜法HPTLC是近年來(lái)迅速發(fā)展的一種高效、快速、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高和重現(xiàn)性好的薄層色譜新技術(shù)。高效薄層色譜采用更細(xì)、更均勻的改性硅膠和纖維素為固定相，對(duì)吸附劑進(jìn)行疏水和親水改性，可以實(shí)現(xiàn)正相和反相薄層色譜分離，提高了色譜的選擇性，彌補(bǔ)了常規(guī)的普通薄層色譜TLC存在的展開時(shí)間長(zhǎng)、展開劑體積需求大和分離結(jié)果差等缺點(diǎn)。薄層色譜掃描儀由單板機(jī)控制和配備積分儀的薄層掃描儀，轉(zhuǎn)型為以工作站控制的臺(tái)式計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制操作的薄層掃描儀。使用薄層色譜掃描儀進(jìn)行定量檢測(cè)有吸收測(cè)定法、熒光測(cè)定法和熒光猝滅法。對(duì)在可見(jiàn)及紫外光區(qū)有吸收的化合物可用鎢燈和氘燈在 190800nm范圍進(jìn)行透射和反射吸收法測(cè)定；化合物本身或者經(jīng)過(guò)色譜前和色譜后衍生化生成對(duì)紫外有吸收并能放出更長(zhǎng)波長(zhǎng)的化合物適用熒光法測(cè)量，熒光法靈敏度高，最低可測(cè)至pg級(jí)；本身無(wú)顏色、又無(wú)特征紫外吸收或熒光，并且不易衍生的化合物，可使用含有熒光劑的薄層板，采用熒光猝滅法測(cè)量。此外，自動(dòng)鋪板儀、電動(dòng)噴霧器、自動(dòng)點(diǎn)樣儀、薄層色譜展開儀、薄層色譜成像儀等的使用，使薄層色譜法逐步實(shí)現(xiàn)了儀器化。3. 薄層色譜的規(guī)范化操作在過(guò)去的實(shí)驗(yàn)教材中，很多屬于經(jīng)驗(yàn)性操作，薄層色譜的結(jié)果難以重現(xiàn)。如自制薄層板，制備時(shí)硅膠中加入羧甲基纖維素鈉水溶液的量，以研棒勻漿下滴判斷；傾注薄板上，以手指顛動(dòng)至均勻；點(diǎn)樣不定量，以點(diǎn)的直徑約為2 mm為標(biāo)準(zhǔn)；在電爐上加熱顯色，直至斑點(diǎn)清晰等。另外，在薄層板下沿“刻痕 ”、“標(biāo)記對(duì)展開有很大影響；搖動(dòng)展開缸混合展開劑很難將不同極性試劑混勻，混合不均勻和有分層的展開劑，會(huì)造成層析的完全失敗。為了得到有良好的分離度和重現(xiàn)性的色譜，在實(shí)驗(yàn)操作中一定要強(qiáng)調(diào)規(guī)范化。如薄層板最好是購(gòu)置高效或普通薄層板。即使自制，也應(yīng)將硅膠和水的比例、鋪板的厚度固定，使用鋪板器鋪板。即使用于鑒別，樣品的制備應(yīng)量化操作并進(jìn)行預(yù)處理，以減少雜質(zhì)的干擾，提高色譜的清晰度，提高可鑒別性。在薄層板上定量點(diǎn)樣，則樣品得到的色譜不僅以回答“有沒(méi)有 ”和“是不是”的問(wèn)題，還可以粗略地進(jìn)行量化評(píng)價(jià)，在一定程度上提供“優(yōu)劣”的信息。點(diǎn)樣最好采用半自動(dòng)或自動(dòng)噴霧點(diǎn)樣儀，若用手工定量毛細(xì)管接觸式點(diǎn)樣，操作需要細(xì)致小心，不可劃破薄層板，原點(diǎn)盡量減少溶劑擴(kuò)散現(xiàn)象。在其他條件相同的情況下，溫度和濕度對(duì)色譜質(zhì)量有顯著影響。為了不同實(shí)驗(yàn)室之間及不同季節(jié)均可重現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)盡可能在溫度和相對(duì)濕度可控 的條件下展開為宜，至少記錄下試驗(yàn)時(shí)實(shí)際的溫度和濕度。 在實(shí)驗(yàn)課中，每一步驟都要強(qiáng)調(diào)規(guī)范化操作，是學(xué)生在技術(shù)層面得到更明顯的提高。為了彌補(bǔ)教材的滯后性，在理論課中要不斷的將薄層色譜新發(fā)展，新技術(shù)補(bǔ)充進(jìn)課堂 。不但讓學(xué)生掌握現(xiàn)有知識(shí)，還要對(duì)今后的發(fā)展具有前瞻性
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1