動(dòng)物固體組織蛋白提取protocol-資料下載頁(yè)
2025-06-29 21:59本頁(yè)面
【正文】 抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲(chǔ)藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50μg/ml1mg/ml水溶液對(duì)胰凝蛋白酶，胃液素，纖溶酶無(wú)影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶1040μg/ml或1020μM100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶10mg/mlPBS溶液避免反復(fù)動(dòng)凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40μg/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制劑Ⅰ、ⅡCalpain (鈣依賴(lài)性半胱氨酸蛋白酶)Ⅰ:17μg/mlⅡ:7μg/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜朊酶素胰凝乳蛋白酶660μg/ml溶于DMSO絲氨酸，半胱氨酸和金屬蛋白酶每1050ml細(xì)胞提取液內(nèi)加一片不含EDTAEDTA金屬蛋白酶500mmol/L水溶液pH=抑蛋白酶醛肽絲氨酸蛋白酶，巰基蛋白酶10mg/ml水溶液a2巨球蛋白廣譜1∪/ml100∪/ml PBS 溶液避免接觸還原劑Pefabloc SC(boe hringer Mannheim)絲氨酸蛋白酶100mM水溶液無(wú)毒，在中性pH下較PMSF 穩(wěn)定胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶1mg/ml甲醇溶液PMSF絲氨酸蛋白酶17170μg/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時(shí)新鮮加入TLCK胰蛋白酶3750μg/ml1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶液，pH=對(duì)胰凝蛋白酶無(wú)影響TPCK胰凝乳蛋白酶70100μg/ml3mg/ml乙醇溶液對(duì)胰蛋白酶無(wú)影響PMSF(Pheylmethylsulfonyl fluoride)是很常見(jiàn)的抑制劑，使用濃度為1 mmol/L。不可逆抑制絲氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。 AEBSF 絲氨酸抑制劑，使用濃度為4 mmol/L。AEBSF的抑制活性與PMSF相近，但它更易溶于水而且毒性低。因此是PMSF最佳的替代品，但價(jià)格較高。磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉 溶解性：溶于水分子量：使用：貯存液5M，工作濃度10~20mM。Na3VO4 原礬酸鈉 分子量：溶解性：溶于水，我們購(gòu)買(mǎi)過(guò)來(lái)的是原礬酸鈉。原礬酸鈉需要經(jīng)過(guò)處理以后才能成為激活的礬酸鈉，激活的礬酸鈉才具有抑制去磷酸化的作用。原因：原釩酸鈉有一定程度的聚合，使用前要激活使之變成單體才有最大抑制效價(jià)原礬酸鈉變成激活的礬酸鈉的過(guò)程是：100mM 原礬酸鈉激活儲(chǔ)存液配制(1). ，加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)。(2). 煮至無(wú)色(3). 室溫冷卻(4). 重調(diào)pH至10(5). 重復(fù)(1)(2)(3)(4)直至溶液保持無(wú)色，并且pH穩(wěn)定于10，分裝100ul/管，每10ml裂解液加一管。使用：貯存液100mM， 工作濃度1mM，20度保存。Betaglycerophosphate 甘油磷酸鈉溶解性：溶于水分子量：使用：貯存液100mM， 工作濃度25mM。Na2P2O4 焦磷酸鈉溶解性：溶于水分子量：使用：貯存液100mM，工作濃度12 m
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