血清中提取igm方法和蛋白連接方法-資料下載頁
2024-11-17 22:17本頁面
【正文】 (4) 硫酸銨。(5) 辛酸。(三). 操作步驟抗血清用4倍體積乙酸乙酸鈉緩沖液稀釋。室溫下邊攪拌（磁力攪拌器或電功攪拌器），邊緩慢滴加辛酸（25ml/L血清稀釋液），滴加完后繼續(xù)攪拌30min。離心(10000r/min，30min)，收集上清液，棄去沉淀。上清液用多層紗布過濾。按1/10體積加入10PBS，用5mol/L 。上清液4℃預冷，計算溶液總體積，在4℃按277g/L加入硫酸銨粉沫（45%飽和度），邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌30min。離心（5000r/min，15min)），棄去上清液。收集沉淀。沉淀用少量透析液溶解（一般為血清體積的1/10），透析并更換兩次透析液或用Sephadex G50脫鹽。Ig溶液在50～55℃水浴中加熱20min，離心(5000r/min，20min)，上清液20℃保存或凍干保存。(一)戊二醛二步標記法：a) 取兔抗TOX ,，加入25%，37℃溫育2h后加入冰冷的分析純的無水乙醇2ml，2500r/min離心沉淀10min~15min，傾去溶液。b) 沉淀以80%乙醇4ml~5ml混懸，同上離心，傾去乙醇，將管倒置，使乙醇充分流出。c) 沉淀用1ml ，~1ml 抗IgG抗體溶液(含抗體15mg左右)，放在冰箱內(nèi)過夜后，加KH2 PO4，使近中性即可應用。 內(nèi)容總結
（1）在激烈攪拌的條件下，加預冷的酒精（20℃）到最終濃度為20%保持在5℃
（2）從沉淀（B）可按下述方法進一步分離出IgA和IgM的混合物：將沉淀（B）懸浮在0℃ 水中，離心去除不溶的蛋白
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