【正文】 、HDLC均采用北京中生生物試劑公司試劑盒測(cè)定。（2）肝脂質(zhì)及肝體比值測(cè)定實(shí)驗(yàn)第10周末，測(cè)量實(shí)驗(yàn)大鼠體重，然后經(jīng)股靜脈放血處死動(dòng)物，立即摘取肝臟，稱重，計(jì)算出肝體比值。取新鮮肝組織5g制備成肝均漿，用氯仿、甲醇溶液浸泡72h，過(guò)濾，65℃蒸干，石油醚溶解定容，測(cè)定TC及TG，TC、TG均采用北京中生生物試劑公司試劑盒測(cè)定。（3）肝組織病理學(xué)檢查肝臟離體肉眼外觀檢查后，用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色。（4）血清和組織中LPO測(cè)定實(shí)驗(yàn)第10周末，空腹15h，取血和心、腦、肝組織應(yīng)用Riely法測(cè)LPO含量。 （5）血清SOD和GSHPx測(cè)定實(shí)驗(yàn)第10周末，空腹15h，取血清測(cè)SOD、GSHPx活力，SOD用亞硝酸鹽生成抑制法，GSHPx用夏奕明等方法。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析各項(xiàng)數(shù)據(jù)均采用生物統(tǒng)計(jì)SAS軟件進(jìn)行方差分析，兩組間比較用t檢驗(yàn)。　結(jié) 果 麥胚黃酮對(duì)大鼠肝脂質(zhì)及肝體比值的影響麥胚黃酮對(duì)大鼠肝脂質(zhì)及肝體比值的影響見表31所示，由于高脂膳食，大鼠肝臟脂質(zhì)積累，高脂模型組大鼠肝組織中的TC和TG都極顯著地高于正常對(duì)照組(P)，而三組灌胃麥胚黃酮的大鼠肝組織的TC、TG和正常對(duì)照組相比也有顯著性差異(P)，而MD組降低大鼠肝組織中TC、TG含量的效果優(yōu)于LD和HD組。肝體比值的結(jié)果也顯示了同一效應(yīng)的存在。表明麥胚黃酮能夠明顯地減少肝臟脂質(zhì)積累。表31 麥胚黃酮對(duì)大鼠肝臟中TC、TG含量及肝體比值的影響Table 31 The flavone of wheat germ effect on TC、TG content in liver ratio of the impact of body組　　別NTC(mg)TG(mg)肝體比(%)NC12177。177。177。HFC12177。177。177。LD12177。177。177。MD12177。177。177。HD12177。177。177。a：P 與NC組比較；b：P 與HFC組比較 麥胚黃酮對(duì)大鼠血脂的影響麥胚黃酮對(duì)大鼠血脂的影響見表32所示，HFC組的TC、TG顯著高于NC組（P），HDLC顯著低于NC組（P），表明飼喂高脂飼料可導(dǎo)致大鼠高脂血癥；LD、MD和HD組TC、TG極顯著低于HFC組（P），HDLC極顯著高于HFC組（P）。提示，麥胚黃酮具有降血脂作用，而且MD組降血脂效果優(yōu)于LD和HD組。表32 麥胚黃酮對(duì)大鼠血清TC、TG和HDLC含量的影響Table 32 The flavone of wheat germ effect on serum TC, TG and HDLC content 　　　　　 組　　別NTCMmol/LTGmmol/LHDLCmmol/LNC12177。177。177。HFC12177。177。177。LD12177。177。177。MD12177。177。177。HD12177。177。177。a: p 與NC組比較；b: P 與HFC組比較 肝組織病理學(xué)檢查肉眼檢查 高脂模型大鼠肝臟體積大，包膜緊張，色澤黃膩，呈典型肝脂變；灌胃麥胚黃酮的大鼠肝脂變有不同程度的減輕，其中HD組最輕，且部分肝臟外觀接近正常。鏡　　檢 圖31顯示了NC組大鼠肝臟無(wú)異常。從圖32可見，高脂模型組大鼠肝臟呈彌漫性肝脂肪變性，以肝小葉周邊帶病變最為嚴(yán)重，肝細(xì)胞明顯脹大，胞漿內(nèi)有大量脂滴，并出現(xiàn)點(diǎn)狀和灶性壞死區(qū)。從圖3圖3圖35可以看出，飼喂麥胚黃酮的大鼠病變較輕，尤其HD組，肝細(xì)胞排列、形態(tài)幾乎與正常組無(wú)明顯差異。這一結(jié)果與肝臟脂質(zhì)測(cè)定結(jié)果相吻合?！　D31 NC組大鼠肝臟組織切片(HE200) 圖32 HFC組大鼠肝臟組織切片(HE200) 圖33 HD組大鼠肝臟組織切片(HE200)Fig 31 NC rats liver tissue (HE200) Fig 32 HFC rats liver tissue (HE200) Fig 33 HD rats liver tissue (HE200)　　　　　圖34　MD組大鼠肝臟組織切片(HE200)　 圖35 LD組大鼠肝臟組織切片(HE200)Fig 34 MD rats liver tissue (HE200) Fig 35 LD rats liver tissue (HE200) 麥胚黃酮對(duì)大鼠血清和組織中LPO含量的影響麥胚黃酮對(duì)大鼠血清和組織中LPO含量的影響見表33所示，高脂血癥大鼠在血脂升高的同時(shí)，血清和組織中LPO的含量也顯著升高（P）。麥胚黃酮能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清和組織中LPO含量（P），且組織中LPO含量在LD和MD組間有顯著差異（P）。表33 麥胚黃酮對(duì)大鼠血清和組織中LPO含量的影響Table 33 The flavoneof wheat germ on serum and tissue content of LPO組　　別N血　　清mmol/L組　　織nmol/gNC12177。177。HFC12177。177。LD12177。177。MD12177。177。HD12177。177。a：P；b：P；c：P；d：P 麥胚黃酮對(duì)大鼠血清SOD和GSHPx活性的影響麥胚黃酮對(duì)大鼠血清SOD和GSHPx活性的影響見表34所示，高脂飼料可顯著降低大鼠血清SOD和GSHPx的活性（P），LD組、MD組和HD組SOD活性顯著高于HFC組（P, P），LD組、MD組和HD組GSHPx活性顯著高于HFC組（P）。表明麥胚黃酮能夠提高大鼠血清中SOD和GSHPx的活性，具有顯著增強(qiáng)大鼠抗氧化能力，就SOD來(lái)說(shuō)，HD組效果明顯優(yōu)于LD組。　　表34 麥胚黃酮對(duì)大鼠全血SOD和GSHPx活性的影響　Table 34 The flavone of wheat germ effect on SOD and GSHPx activity of blood rats組　　別nSOD活性U/LGSHPx 活性KU/LNC12177。177。HFC12177。177。LD12177。177。MD12177。177。HD12177。177。a：P；b：P；c：P　討論 麥胚黃酮的降血脂作用降脂實(shí)驗(yàn)表明，麥胚黃酮可以降低高脂血癥大鼠血清及肝臟中TC、TG水平，升高HDLC含量，另外，可降低肝體比。文獻(xiàn)表明，高脂型的AS主要與HDL和LDL水平有關(guān)，HDL可將體外膽固醇運(yùn)送到肝臟內(nèi)，因而可降低血液中膽固醇的濃度，HDL能夠轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)脈壁膽固醇到肝臟分解為膽酸，是有效的抗AS因子。而影響HDL轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的主要因素是卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）活性，LCAT能夠使血中膽固醇催化生成膽固醇酯轉(zhuǎn)入HDL核心部分而轉(zhuǎn)動(dòng)，HDL的含量反映了從心腦血管系統(tǒng)運(yùn)送膽固醇至肝臟代謝的活躍程度。 此結(jié)果揭示麥胚黃酮抗AS的機(jī)制與降血脂有關(guān)。 麥胚黃酮的抗氧化作用大量資料表明，AS的發(fā)生與脂質(zhì)過(guò)氧化的損傷的關(guān)。當(dāng)機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失去平衡時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，血清中活性氧自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化而產(chǎn)生大量的丙二醛（MDA），它能與LDL結(jié)合成一種對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有較強(qiáng)的損傷作用的復(fù)合物，當(dāng)這種復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇堆積并轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞，形成AS早期病變。ROSS認(rèn)為L(zhǎng)PO對(duì)膽固醇酯酶活性的抑制，也有助于TC的沉積，促進(jìn)AS的形成和發(fā)展。麥胚黃酮能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清和組織中LPO含量清除過(guò)多活性氧自由基。SOD、GSHPx是體內(nèi)最重要的抗氧化酶，在機(jī)體抗自由基損傷中起著重要作用。Thomas等報(bào)道GSHPx對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞防御氧化LDL損傷也起到重要作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麥胚黃酮顯著增強(qiáng)大鼠血液中SOD和GSHPx活性，提示麥胚黃酮可能通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶類的生物合成而增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，從而有效地防止AS的發(fā)生。 小結(jié)（1）研究結(jié)果表明，麥胚黃酮能夠明顯地減少肝臟脂質(zhì)積累，明顯地降低大鼠血清和肝臟中TC、TG的含量(P,P)，提高HDLC的含量(P)。　　　　　（2）麥胚黃酮對(duì)高脂血癥大鼠具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能顯著降低血清和組織中LPO含量(P)，提高SOD和GSHPx的活性(P)。有效劑量為200mg/。第四章 麥胚黃酮在不同氧化體系的抗氧化作用研究現(xiàn)代自由基理論證實(shí)，生物體代謝產(chǎn)生的活性氧自由基在體內(nèi)積累是導(dǎo)致人體衰老及多種疾病產(chǎn)生的重要原因之一。清除體內(nèi)自由基有利于延緩衰老，預(yù)防疾病已得到越來(lái)越多人的認(rèn)可。隨著人們生活水平的提高，尋找并研究開發(fā)相應(yīng)的新型食物資源成為食品研究開發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。麥胚是面粉工業(yè)的副產(chǎn)品，但卻蘊(yùn)含著豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，是一種優(yōu)良天然食品營(yíng)養(yǎng)源，尤其是它含有的一些保健因子，具有保護(hù)大腦、抗氧化、抗衰老及預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化（AS）等功能。麥胚黃酮是優(yōu)良的活性氧清除劑和脂質(zhì)抗氧化劑，其清除自由基和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的機(jī)理是：與超氧陰離子反應(yīng)阻止自由基反應(yīng)的引發(fā)，與鐵離子絡(luò)合阻止羥基自由基的生成，與脂質(zhì)過(guò)氧化基反應(yīng)阻止脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。黃酮類化合物兼有親水性和親脂性，其主要的抗氧化活性基團(tuán)是酚羥基，特別是苯基B環(huán)4，位羥基和3，、4，位的鄰二羥基，其次是3位的雙鍵。對(duì)其生物活性已經(jīng)做了不少研究。磷酸緩沖液（PBS）、二乙三胺五醋酸、DL－二巰蘇糖醇（DTT）、硫代巴比妥酸（TBA）、鄰菲羅啉、Tris、硫酸亞鐵、冰乙酸、EDTA、過(guò)氧化氫、硫代硫酸鈉、鄰苯三酚。電熱恒溫水浴鍋：DH4000，型天津泰斯特儀器有限公司；離心機(jī)：LD52A ，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；電熱恒溫培養(yǎng)箱：DRP9082型，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。油脂的主要成分是各種脂肪酸甘油脂的混合物，脂肪酸有飽和的和不飽和的。油脂在貯藏過(guò)程中會(huì)發(fā)生變質(zhì)，特別是含有不飽和的脂肪酸甘油脂。由于其結(jié)構(gòu)上有不飽和鍵的存在，很容易和空氣中的氧氣發(fā)生自動(dòng)氧化反應(yīng)，生成過(guò)氧化物，進(jìn)而斷裂分解，產(chǎn)生具有臭味的醛或碳鏈較短的羧酸。促進(jìn)體內(nèi)脂肪過(guò)氧化，過(guò)氧化的脂質(zhì)可破壞生物膜，引起細(xì)胞功能衰退直至組織壞死，誘發(fā)各種生理異常而致疾病的發(fā)生。油脂的自動(dòng)氧化是一種自由基反應(yīng)，首先發(fā)生在不飽和雙鍵鄰近的次甲基上，生成自由基。在反應(yīng)中，氫過(guò)氧化物（ROOH）是自動(dòng)氧化的第一個(gè)中間產(chǎn)物，本身并無(wú)異味，POV值的提高已標(biāo)志油脂已開始酸敗。或產(chǎn)生的自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，生成丙二醛。所以，POV值和丙二醛（MDA）含量作為油脂自動(dòng)氧化的主要指標(biāo)。在生命活動(dòng)的氧化代謝過(guò)程中不斷產(chǎn)生各種自由基，其中O?OH是體內(nèi)最活潑的活性氧可介導(dǎo)許多病理變化，如引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，并損傷膜結(jié)構(gòu)及功能，因此測(cè)定麥胚黃酮對(duì)O2－、?OH的清除作用具有重要的生物學(xué)意義?！∝i脂過(guò)氧化值測(cè)定。采用烘爐儲(chǔ)存試驗(yàn)，試驗(yàn)溫度控制在60177。1℃，定期測(cè)定樣品油脂的過(guò)氧化值POV值?！∝i脂中丙二醛值測(cè)定豬油受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在538nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出豬油的酸敗程度。丙二醛標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作參照GB101461988進(jìn)行。精確稱取1，1，3，3－，溶解后稀釋至1000mL(每毫升相當(dāng)于丙二醛含量為100μg)，精確移取上述儲(chǔ)備液10mL稀釋至100mL(每毫升相當(dāng)于丙二醛量為10μg)， mL、 mL、 mL、 mL、 mL、(相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)丙二醛濃度分別為1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg)，置于25mL納氏比色管內(nèi)，加入5mL TBA溶液，混勻，加塞，置于90℃水浴內(nèi)保溫40min，取出，冷卻1h，移入小試管內(nèi)，離心5min，上清液傾入25mL鈉氏比色管內(nèi)，加入5mL氯仿，搖勻，靜止，分層，吸出上清液于538nm波長(zhǎng)處比色(同時(shí)作空白試驗(yàn))。根據(jù)得出吸光度值作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖21)?！←溑唿S酮對(duì)O2－的清除試驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)測(cè)定O2－采用鄰苯三酚自氧化的比色分析法?！　溶液配制Tris－HCL緩沖液：pH=，c=1500mmol/L；二乙三胺五醋酸水溶液：c=3mmol/L；鄰苯三酚溶液：c=；DL－二巰蘇糖醇（DTT）溶液：c=100mmol/L。B　實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)按表41分組，試劑從表左至表右依次加入試管。表41　鄰苯三酚反應(yīng)測(cè)定O2－清除率的實(shí)驗(yàn)過(guò)程Table 41 The pyrogallol measured reaction rate of O2removal experiment順序號(hào) 　　1 　　 2 　　 3 　　 4 　　 5試劑 　Tris 　 　 二乙三胺五醋酸 　 去離子水 　　 樣品　 鄰苯三酚第一組A00 　　 　　 　　 　　 0 　　 0第二組A01　　　 　　　 　　 　　 0 　　 第三組A10　　　 　　 　　 　　 　　 0第四組A11 　 　　 　　 0