【正文】 清 PL定量 方法兩大類 : 測定無機(jī)磷 化學(xué)法和酶 法 ,以酶法廣 泛應(yīng)用于臨 床自動(dòng)化檢 測。 參考范圍 : 成人 ～ mmol/L； 磷脂測定 返回節(jié) 臨床上將 Cl0以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸 (FFA) 正常血清中含有 : 油 酸 (C18:1)占 54％ 軟脂酸 (C16:1)占 34％ 硬脂酸 (C18:1)占 6％ 另外還有月掛酸 (C22:0)、肉豆蔻酸 (C14:0)和花生四烯酸 (C20:1)等含量很少的脂肪酸，其含量水平極易受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響。 血中 FFA半壽期為 1～ 2min，極短。 游離脂肪酸測定 返回節(jié) 測定血清 FFA法有 : 滴定法、比色法、原子分光光度法、效液相層析 法酶法 ，一般多以酶法測定。 作 FFA測定的標(biāo)本 ,一定要注意 : 在 4℃ 條件下分離血清并進(jìn)行測定。 貯存的標(biāo)本僅限于 24h內(nèi)，若保存三天，其升高值約 30％，使結(jié)果不準(zhǔn)確。 參考范圍 : 成人 ～ 兒童和肥胖成人稍高 返回節(jié) 熒光法、比色法 、熒光法及比色法較適用。 標(biāo)本 :全血標(biāo)本室溫可保存 24h，漿 (清 ) 4～ 8℃ 冷藏可保存 3天、冷凍可保存 1周。脂血和黃膽，測定結(jié)果偏高。 參考范圍 熒光法： 2～ 4μmol/L 比色法：男性 177。 女性 177。 過氧化脂質(zhì)測定 返回節(jié) 電泳分離法分離 , 各種脂蛋白，主要是 : CM(原點(diǎn) ) α LP β LP Preβ LP 因?yàn)檎？崭?12h后，血漿中無CM存在。 二、血漿脂蛋白測定 電泳分離法 返回節(jié) 血漿 4℃ 16h ～ 24h靜置，觀察血漿混濁程度，稱為血漿靜置實(shí)驗(yàn) : 若出現(xiàn)奶油樣上層，即 CM增加，若下層為混濁者 ,即VLDL增加。 若 LDL增加，血漿仍呈現(xiàn)透明狀態(tài)。 健康人，實(shí)驗(yàn)陰性。 血漿靜置實(shí)驗(yàn) 返回節(jié) 脂蛋白是一種既有蛋白質(zhì)又有膽固醇，還有磷脂的復(fù)合體，如何定量，尚無一種較為理想的方法因?yàn)橹鞍字心懝檀己枯^為穩(wěn)定，因此目前以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)。 參考范圍： (1)血清 HDLC (2)血清 LDLC 成人 ～ 兒童 血漿脂蛋白膽固醇測定 返回節(jié) 間接法計(jì)算法 利用血清中 TC、 TG和 HDLC含量按公式推算出 LDLC的量。 這一方法是 Friedewald于 1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式： 這一公式是有條件的： 空腹血清不含 CM TG濃度在 Ⅲ 型高脂血癥除外 返回節(jié) LDLC=TC－ [HDLC+(TG 1/5)] 高膽固醇血癥監(jiān)測方案 高膽固醇血癥等 高脂血癥均建議 按此方案進(jìn)行監(jiān)測 返回節(jié) Lp(a)測定法 : (1)免疫法：免疫透射比濁法使用最為廣泛， (2) Lp(a)C測定法： 測定方法有 : 超速離心法、麥胚血凝素法和瓊脂糖凝膠電泳法 ，后兩種方法在臨床應(yīng)用較廣。 人群中血漿 Lp(a)水平呈 偏態(tài)分布，個(gè)體差異很大，其健康人群血漿含量可達(dá) 0～ 1000mg/L范圍 。 經(jīng)過人群調(diào)查和臨床應(yīng)用研究。 參考范圍： 300mg/L以下。 返回節(jié) 血清載脂蛋白 (Apo)包括 ApoAI、 A Ⅱ 、 B100、 C Ⅱ 、CⅢ 、 E和 (a)，已屬常規(guī)檢測項(xiàng)目 檢測方法有 : (1)免疫擴(kuò)散法 ,主要用于科研 (2)免疫火箭電泳 ,主要用于科研 (3)免疫比濁法 三、載脂蛋白測定 返回節(jié) 測定過程一定要與結(jié)構(gòu)和機(jī)能類似的肝脂酶 (HTGL)區(qū)別。 LPL是結(jié)合在細(xì)胞表面作為肝素受體的蛋白多糖，可用注射肝素競爭性地結(jié)合到細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)多糖分子后，酶被置換下來進(jìn)入血漿。 采用 LPL單克隆抗體的酶免疫方法進(jìn)行檢測，標(biāo)本為血清或肝素抗凝血漿。 參考范圍： 136～ 321 mg/L。 四、血漿脂代謝相關(guān)蛋白與酶的測定 血清 (漿 )LPL測定 返回節(jié) 利用單克隆抗體進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，標(biāo)本必須是肝素抗凝血漿。以函數(shù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線再計(jì)算檢測方法為免疫透射比濁法，目前尚無公認(rèn)的檢測方法和參考范圍。 血漿 LCAT測定 采用微脂粒底物法，即微脂粒被血清中 HDL吸附后，成為 LCAT底物，在 37℃ 條件下，經(jīng)一定時(shí)間反應(yīng)， LCAT活性值可依據(jù)游離膽固醇的減少量進(jìn)行定量。目前尚無統(tǒng)一參考檢測方法。 參考范圍： 382～ 512 U/L 血漿 CETP測定 返回節(jié) ApoE蛋白表型分型法 : IEF 基因分型法 : 基因分析技術(shù) (較為簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠 ) 根據(jù)湖北漢族人群調(diào)查（ 1236例） ApoEε 常見基因型頻率分布 : 2/2: % 、 3/2: % 、 3/3: % 4/3: % 、 4/4: % 、 4/2: % ApoEε 常見等位基因頻率分布 : ε2: % 、 ε3: % 、 ε4: % 以 ApoE多態(tài)性為手段進(jìn)行研究有重要臨床意義 基因型的 “ 壞 ” ε4 和 “ 好 ” ε2 的等位基因之分 返回節(jié) 五、脂質(zhì)代謝紊亂的相關(guān)基因突變分析 高脂蛋白血癥與 AS均有一定的家族性和遺傳性，因此有關(guān)基因結(jié)構(gòu)功能和調(diào)節(jié)的異?？赡苁前l(fā)病的重要原因之一。 AS的基因診斷應(yīng)包括 DNA水平和 RNA水平的分析，前者分析基因的結(jié)構(gòu)，后者檢測基因的表達(dá)。 目前還不能總結(jié)出這些基因變化與 AS形成的確切關(guān)系 ,還未找到引起 AS和高脂蛋白血癥的關(guān)鍵基因及其關(guān)鍵基因缺陷、位置和性質(zhì)。 其他相關(guān)基因分析 返回節(jié) 遺傳性性溶酶體脂質(zhì)貯積病的實(shí)驗(yàn)診斷有以下 幾方面： 進(jìn)行全面體格檢查 。 骨髓和外周血細(xì)胞學(xué)檢查 ，主要觀察骨髓細(xì)胞的特大泡沫細(xì)胞的出現(xiàn)，如 NiemannPick細(xì)胞、 Gaucher細(xì)胞等。 細(xì)胞學(xué)形態(tài)特征僅能確認(rèn) 為溶酶體有關(guān)疾病，但屬于何種缺陷病無法診斷，更無法精確到何種酶缺陷病癥。 六、溶酶體疾病實(shí)驗(yàn)診斷 返回節(jié) 圖 高雪病骨髓泡沫細(xì)胞高倍鏡鏡照片 采用電鏡觀察外周血巨噬細(xì)胞溶酶體形態(tài)的超微結(jié)構(gòu)異常改變。 如 NiemannPick細(xì)胞、 Gaucher細(xì)胞 等，該類細(xì)胞比一般紅細(xì)胞大到 5～ 10倍，有 1～ 3個(gè)偏于一邊的細(xì)胞核，胞漿呈桑椹子狀，如圖所示 , 具有診斷價(jià)值。 返回節(jié) 測定常規(guī)生化指標(biāo)， 特別是血脂水平、肝功能、腎功 能等功能檢查。 測定溶酶體的特種酶活性 ，有確診意義的 : 殼三糖苷酶 , Gaucher病患者血濃度略升高，尼匹 病升高水平可高達(dá)健康人的 100倍之多。 鞘磷脂酶 ,活性降低或缺乏，是確診尼匹病的依據(jù) 之一。 葡萄糖腦苷脂酶 活性降低或缺乏，是確診 Gaucher 病的依據(jù)之一。 采用高效液相色譜技術(shù) , 對(duì)血漿脂質(zhì)成分分析和酶 的活性測定。 進(jìn)行物理學(xué)檢查， 如 x線、 CT、 ECT等檢查肝、脾、 骨骼和腦部位的病理改變。 返回節(jié) 基因分析 可分別采用： PCR、 RFLP、多重 PCR、斑點(diǎn)雜交、DNA芯片技術(shù)、克隆和 DNA測序等分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行基因分析 溶酶體脂質(zhì)貯積病完全可以通過基因分析，才能得到準(zhǔn)確的診斷。 檢測標(biāo)本 :血細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、毛球、骨骼、妊婦外周血中殘留的胎兒 DNA、有核紅細(xì)胞作為檢測標(biāo)本 。 或者通過羊水穿刺 , 取羊水胎兒脫落細(xì)胞或絨毛等標(biāo)本 ,進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷。 返回章 返回節(jié) 謝 謝！ 退出