大腸桿菌基因工程(2)-資料下載頁
2025-05-26 06:23本頁面
【正文】 Met Met Met M M N C M M N C 化學(xué)合成 A鏈 和 B鏈的編碼 序列 A鏈和 B鏈分別表達(dá)法 表達(dá)產(chǎn)物的后處理路線： M M N C M M N C bGal bGal A B CNBr 處理 N C S S S S C N S S N C N C N C N C Cys 體外氧化和重折疊 分離純化 人胰島素原（ BCA）表達(dá)法 基因工程菌的構(gòu)建策略： tac bGal C peptide ori Apr Met Met M M N C B peptide A peptide 人胰島素原的 cDNA 重組人胰島素原 轉(zhuǎn)化 分離純化 表達(dá)產(chǎn)物的后處理路線： S S S S C N 胰蛋白酶 C peptide A peptide B peptide M R R K R CNBr R S S S S C N N C S S S S R 羧肽酶 B B鏈中第 22位上的 Arg和第 29 位上的 Lys由于良好折疊的原 因，對胰蛋白酶不敏感 人胰島素原（ BCA）表達(dá)法 A鏈和 B鏈同時表達(dá)法 tac bGal ori Apr Met Met M M N C B peptide A peptide 化學(xué)合成 AB鏈編碼序列 重組人胰島素 轉(zhuǎn)化 分離純化 CNBr 處理 特異性裂解 體外折疊 試述大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)工程菌構(gòu)建技術(shù)路線及工程菌鑒定內(nèi)容。 工程菌質(zhì)粒不穩(wěn)定性的表現(xiàn)形式和機(jī)制是什么？有哪些改進(jìn)策略？ 如何進(jìn)行工程菌遺傳穩(wěn)定性分析？分析項目包括哪些？什么是質(zhì)粒的宏觀逃逸率？如何測定？ 工程菌常規(guī)保存條件為何？菌種庫包括哪幾種形式？相互關(guān)系如何？ 影響工程菌發(fā)酵的主要因素有哪些？ 什么是工程菌的生長曲線和表達(dá)曲線？最佳誘導(dǎo)時機(jī)在工程菌生長曲線中的什么時期？ 工程菌工業(yè)發(fā)酵工藝流程如何？發(fā)酵工藝研究需要解決的主要問題是什么？如何實現(xiàn)大腸桿菌高密度發(fā)酵？ 表達(dá)產(chǎn)物分離純化研究的主要內(nèi)容和原則是什么？ 大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)產(chǎn)物粗提工藝包括哪些內(nèi)容？ 表達(dá)產(chǎn)物精純的主要任務(wù)是什么？為什么主要采用色譜柱分離（層析）技術(shù)？在分離純化三步策略中各有哪些層析技術(shù)可選擇？ 思考題（工程菌構(gòu)建、發(fā)酵、分離純化） 題目： 重組人白介素 2（ rhIL 2 ）大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 請你根據(jù)所學(xué)習(xí)知識，從基因克隆開始，為 rhIL 2構(gòu)建大腸桿菌工程菌株，進(jìn)行工程菌穩(wěn)定性和表達(dá)分析，并根據(jù)你的工程菌構(gòu)建策略提出相應(yīng)的發(fā)酵與分離純化策略。 作業(yè)：在 5月 25日前交， 嚴(yán)禁互相抄襲！ 題目： rhIL 2大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 摘要： 本文研究目的、內(nèi)容與結(jié)果 （ 200字以內(nèi)） 前言： 簡要介紹 rhIL 2的理化特性、基因結(jié)構(gòu)、生物學(xué)活性 、臨床潛在用途、本文研究目的 （ 500字以內(nèi)） 。 材料與方法： 1）菌株、質(zhì)粒、培養(yǎng)基名稱與來源 （可虛擬） 2）工具酶、關(guān)鍵試劑名稱與來源 （可虛擬） 3）儀器：關(guān)鍵儀器名稱與來源 （可虛擬） 4）方法：基因克隆和表達(dá)載體構(gòu)建的全過程、質(zhì)粒與工程菌鑒定、遺傳穩(wěn)定性分析、工程菌培養(yǎng)與表達(dá)誘導(dǎo)分析等的具體方法名稱與基本操作過程。 結(jié)果與討論 1） rhIL 2基因克隆 須包含基因編碼序列、 PCR或 RTPCR的引物序列、供克隆操作的酶切位點等信息。 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果請繪圖。 2）表達(dá)載體與工程菌構(gòu)建 工具質(zhì)粒和宿主菌允許虛構(gòu)，但須注明關(guān)鍵元件、目的基因克隆位點、構(gòu)建所獲表達(dá)載體的物理圖譜（示意圖）、表達(dá)調(diào)控方式、酶切鑒定方法。請盡量采用流程圖形式說明構(gòu)建過程。 3）工程菌生長與表達(dá)分析 須包含工程菌生長曲線、表達(dá)產(chǎn)物初步鑒定（ SDSPAGE、Westernblot）、表達(dá)曲線等。 4）工程菌傳代穩(wěn)定性分析 須包含結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和分配穩(wěn)定性分析結(jié)果 5）發(fā)酵和分離純化策略 必須根據(jù)你的工程菌構(gòu)建策略描繪可能的發(fā)酵與分離純化工藝設(shè)計策略，并給出相應(yīng)的工藝流程圖。
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