【正文】 流法又分為 動態(tài)法 和 靜態(tài)法 兩種 。 2022/5/28 色譜分析 1 145 對分流器的要求 為使分流后的樣品不改變組成： 分流后樣品混合物中各峰的相對大小應(yīng)與未分流的嚴(yán)格一致 。 分析不同濃度的混合物時 ， 峰面積必須正比于濃度 。 當(dāng)柱溫 、 分流比 、 流速改變時各色譜峰的相對大小要保持恒定 。 2022/5/28 色譜分析 1 146 A． 動態(tài)分流法 是目前毛細(xì)管柱進(jìn)樣系統(tǒng)最常用的分流方法，不同儀器上的分流有不同的形式。 2022/5/28 色譜分析 1 147 1— 注射頭； 2— 進(jìn)毛細(xì)管柱； 3— 放空 A— T形旁通管， B— 同心管， C— 反流 T形旁通管， D— 改進(jìn)同心管 2022/5/28 色譜分析 1 148 對分流器設(shè)計要求： 整個分流器要保持在氣化室的溫度下，防止樣品冷凝； 分流前要有一定的混合體積，使試樣、載氣完全混勻， 放空管體積至少要等于樣品氣化后的體積加載氣體積。 2022/5/28 色譜分析 1 149 A為氣化樣品與載氣混合部分， B為分流點(diǎn)， C為噴嘴 引起放空部分與進(jìn)入部分在分流過程中進(jìn)一步混合，確保寬沸程樣品分流后不失真。然后通過放空閥調(diào)節(jié)分流比。這種分流器只是在進(jìn)樣時才打開開關(guān)閥，幾秒鐘后就關(guān)閉大部分載氣，而留下一點(diǎn)出氣，防止試樣反擴(kuò)散進(jìn)柱中。 2022/5/28 色譜分析 1 150 簡易分流器 在一般填充柱氣化室出口，并排插入兩根同內(nèi)徑不同長度的不銹鋼毛細(xì)管，墊上硅橡膠構(gòu)成，其長度比即分流比。 注意 在分流前要有一段混合體積，內(nèi)裝硅烷化玻璃球，可保證分流后組成不失真。 2022/5/28 色譜分析 1 151 HP6820系統(tǒng)的分流裝置 這是 Agilent公司 2022年推出的新型號儀器 HP 6820的進(jìn)樣口裝置。此為分流模式。 同時具有隔膜吹掃功能。 2022/5/28 色譜分析 1 152 HP6820系統(tǒng)的分流裝置 此為不分流模式。通常適用于口徑較大的毛細(xì)管柱，如口徑柱。 2022/5/28 色譜分析 1 153 尾吹 毛細(xì)管柱內(nèi)流動相流速低，流量小，組分會因柱后死體積突然增加而發(fā)生嚴(yán)重的縱向擴(kuò)散，從而導(dǎo)致峰形展寬，有可能使在柱中以分離的組分在柱后再次重疊，影響分離。 也可在使用 FID時受阻于引入的 H2壓力而出柱困難。 增加尾吹氣將改善這一狀況。 2022/5/28 色譜分析 1 154 檢測器 因流速低 ， 且內(nèi)徑細(xì) ， 只能分析小量樣品 ， 約 10―5～ 10－ 6克 ， 有的組份如占%， 則相當(dāng)于 10―7～ 10－ 8克 ， 要求高靈敏度檢測器 。 快速分析時因峰寬只有幾秒或少于 1秒 ，要求檢測器 、 記錄器響應(yīng)時間快 ， 則檢測器和記錄器的時間常數(shù) ， 應(yīng)少于最早峰峰寬的流出時間的 1/20。 2022/5/28 色譜分析 1 155 適用的檢測器有： 高靈敏度的離子化檢測器，常用 FID。（靈敏度高，死體積趨近于零，響應(yīng)時間快等。） 也可用氬離子化和電子捕獲檢測器，此時需在毛細(xì)管出口外加吹洗氣以降低檢測器死體積。 也可應(yīng)用特制的微型熱絲檢測器，微型熱敏電阻檢測器，但因其屬于非商品化檢測器，使用頻率不高。 2022/5/28 色譜分析 1 156 記錄系統(tǒng) 因毛細(xì)管色譜峰很窄 ， 應(yīng)配備快速記錄系統(tǒng) 。 曾經(jīng)用示波儀或電流計型記錄器記錄 ，其滿刻度筆速 。 目前的各種色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)和色譜工站已完全能滿足記錄系統(tǒng)的要求 。 2022/5/28 色譜分析 1 157 毛細(xì)管柱的種類 經(jīng)典的毛細(xì)管柱為壁涂開管柱 (WCOT——Wall Coated Open Tubular Column)。 因其制備難 、 柱子的重復(fù)性差 、 內(nèi)表面小 、涂漬量小和 β 值大 ， 將導(dǎo)致有效塔板數(shù)和實際分離能力不高 ， 且熱穩(wěn)定性也較差 ，故已幾無人使用 。 其他的幾種柱子及其性能如下 。 2022/5/28 色譜分析 1 158 多孔層壁涂柱（ PLOT—— Porous Layer Open Tubular Column）：先涂上吸附劑或惰性固體于柱壁，再涂漬固定液。 載體壁涂柱（ SCOT—— Support Coated Open Tubular Column）：把載體和固定液同時涂于壁上制備而成。 必須注意，以上兩種柱子中的載體只是涂布于毛細(xì)管柱的壁上，而非充滿整根柱子。 熔融石英毛細(xì)管柱 (FSOT—— Fused Silica Open Tubular Column) ：其表面惰性度好，能耐高溫，最主要的是有彈性，不易折斷。 2022/5/28 色譜分析 1 159 交聯(lián)毛細(xì)管柱 (CLOT—— CrossLinked Open Tubular Column)：涂好固定液后再用偶聯(lián)劑交聯(lián)鍵合，柱子性能有很大改善，能耐高溫，抗水、抗溶劑。 大口徑毛細(xì)管柱：一般口徑在 米，液膜厚度為 ~，負(fù)載大，可不經(jīng)分流而直接進(jìn)樣分析。 微型填充柱 (Micropacked Column)：制備過程和填充柱基本相似，只是所填的載體粒度很小。微填充柱寬有很高的柱效，最低板高可達(dá) ~。 2022/5/28 色譜分析 1 160 環(huán)境檢測實例 用 HPWAX毛細(xì)管柱檢測涂料溶劑，用程序升溫模式可得到漂亮的譜圖。 2022/5/28 色譜分析 1 161 海水中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留量 檢測： 八個組分依次為： αHCH、 βHCH、 γHCH、δHCH、 ρ,ρ’DDE、 ρ,ρ’DDD、 ο,ρ’DDT、ρ,ρ’DDT DB1701， 30m (id) ； 柱溫： 70℃ 保持 1min，以15℃ /min升至 220℃ ，保持 10min； 2022/5/28 色譜分析 1 162 高效感溫型殺螨劑 —— 苯丁錫原藥甲醇萃取物的 GCMS總離子流圖 14:50的為雙 （ 2甲基 2苯基丙基 ） 錫 23:62的為 二 (2甲基 2苯基丙基 )叔丁基 氫化錫 R T : 2 . 9 8 2 5 . 6 24 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24T i m e (m i n )05101520253035404550556065707580859095100Relative Abundance1 3 . 5 68 . 0 79 . 4 42 3 . 6 21 3 . 9 98 . 1 82 3 . 9 12 3 . 2 11 1 . 4 9 2 2 . 4 42 1 . 5 31 7 . 9 92 0 . 3 11 4 . 5 0 1 6 . 3 01 2 . 1 31 1 . 3 45 . 1 9 6 . 3 9 7 . 2 5 9 . 5 98 . 2 43 . 6 6NL:2 . 7 8 E6T I C M S b e n d i n g x i za z h i _ 0 2HP5色譜柱 (30m ) 柱溫： 50℃ →3min→ 15℃ /min→240 ℃ →10min ， 2022/5/28 色譜分析 1 163 梔子花頭香成分 萜烯類化合物 （ 如羅勒烯 ， 香葉烯 ） 共 28種 ， 占 ％ ；酯類化合物 （ 如惕各酸酯類 ， 苯甲酸酯類 ） 共 21種 ， 占總揮發(fā)性化合物的 ％ ；醇類化合物 （ 如芳樟醇 ， 6十一醇 ） 共9種 ， 其含量占 ％ 。 R T : 0 . 1 7 4 0 . 0 22 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40T i m e (m i n )05101520253035404550556065707580859095100Relative Abundance1 6 . 5 21 1 . 0 71 5 . 7 11 7 . 3 06 . 2 71 1 . 4 91 2 . 5 31 5 . 2 92 6 . 1 11 3 . 5 41 7 . 8 03 . 7 32 1 . 9 82 0 . 3 5 2 6 . 3 72 . 2 01 9 . 9 55 . 9 92 2 . 4 59 . 5 89 . 3 93 3 . 1 42 4 . 0 82 9 . 4 73 5 . 2 62 8 . 9 7 3 0 . 9 7 3 5 . 9 83 8 . 9 6NL:1 . 1 0 E8T I C M S z h i z i h u a 3 d a y _ 0 1HP5彈性石英毛細(xì)管柱(30m m)；柱溫： 40℃ 停2min， 3℃ /min升至110℃ 停 2min,再以5℃ /min升至 200℃ ，保持 10min 第三章 色譜流動相 Mobile Phase of Chromatography 2022/5/28 色譜分析 1 165 流動相的作用 色譜流動相決不僅僅是被分離物質(zhì)的運(yùn)載體，它直接影響到分離的好壞，也影響到測定的成功與否。 2022/5/28 色譜分析 1 166 流動相的基本情況 流動相的物理、化學(xué)性質(zhì)及其純度將直接影響到色譜系統(tǒng)的： 1) 穩(wěn)定性 2) 分離效率 3) 分離速度 4) 檢測靈敏度 2022/5/28 色譜分析 1 167 流動相的基本種類 GC—— 永久性氣體 HPLC—— 各種低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑及水溶液 2022/5/28 色譜分析 1 168 167。 1. 氣相色譜流動相 GC載氣主要起運(yùn)載作用，對不同分離模型影響不同： GSC：載氣與組分一起與固體吸附劑作用，對分離影響明顯。 GLC：影響氣相速率方程的傳質(zhì)阻力相，需要合理選擇載氣種類。 222 2 22 8 0 .0 12( 1 ) ( 1 )fG PPGLdD k k dH d U UU k D k D???? ? ? ? ? ? ???2022/5/28 色譜分析 1 169 1. 不同載氣的影響 擴(kuò)散系數(shù)與載氣分子量的平方根成反比。 低流速時重載氣為好，柱效高。但高流速時則以輕載氣為好，可以有較大的擴(kuò)散系數(shù)，有利于改善液相傳質(zhì)。 最好用氦氣，用氫氣比較危險。 2022/5/28 色譜分析 1 170 2. 從檢測器考慮載氣的影響 熱導(dǎo)檢測器應(yīng)該用氦氣或氫氣，可獲高靈敏度。 國外氫焰離子化檢測器也用氦氣。 電子捕獲檢測器多用氮?dú)饣驓鍤狻? 2022/5/28 色譜分析 1 171 3. 載氣粘度的影響 載氣粘度直接影響柱壓降，進(jìn)而影響柱效。要選粘度小的。有人用氨做載氣，效果還不錯。 載氣 20℃ 的粘度（ ?P） 100℃ 的粘度（ ?P） 氫氣 二氧化碳 氮?dú)? 氦氣 氬氣 氨氣 84 135 175 194 225 98 103 187 208 228 270 — 2022/5/28 色譜分析 1 172 4. 載氣純度的影響 載氣純度不高所引入的雜質(zhì)易干擾微量組分的檢出。 不純載氣有時會產(chǎn)生負(fù)峰。 2022/5/28 色譜分析 1 173 5. 載氣的凈化方法 脫水： 5A分子篩（低溫下更妙） 除氧： 除烴： 除 CO2： 2022/5/28 色譜分析 1 174 6. 載氣的選擇 氫氣效率高，但危險性大，可選用氫氣發(fā)生器。 高純氣體可為首選。 三合一的氣源值得考慮。 167。 2. 液相色譜流動相 HPLC流動相除了起運(yùn)載作用外，還直接參與分離，影響明顯。 2022/5/28 色譜分析 1 176 1. 色譜流動相的基本要求 保持色譜柱的穩(wěn)定性，因而： 1) 與固定相不互溶 （延長柱壽命） 2) 不發(fā)生不可逆吸附 3) 有合適的 pH值 化學(xué)惰性 —— 不與樣品及固定相發(fā)生反應(yīng)。 2022/5/28 色譜分析 1 177 1. 色譜流動相的基本要求 適用于所選的檢測器 1) UV： 在紫外線區(qū) “ 透明 ” 2) 示差：折射率與溶劑有較大差異 3) 電化學(xué)檢測器：電惰性。 對樣品有很強(qiáng)的溶解力。 清洗與更換方便：可減少更換溶劑時