【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 予體 X 苯 乙醇 質(zhì)子給予體 Y 丁醇 丁酮 定向偶極力 Z 戊酮 2 硝基甲烷 電子接受體 U 硝基丙烷 吡啶 質(zhì)子接受體 S 吡啶 2022/5/28 色譜分析 1 79 2) 兩種評(píng)價(jià)體系的差異 羅氏評(píng)價(jià)物：在測(cè)定時(shí)需要用到氣態(tài)烴類化合物，操作麻煩。麥?zhǔn)险轻槍?duì)該不足而提出，現(xiàn)廣泛采用麥?zhǔn)铣?shù)。 色譜手冊(cè)上有該參數(shù)，有按 5種評(píng)價(jià)物數(shù)值的大小排列的，也有以五項(xiàng)指標(biāo)值之和（或平均值）排列的。 2022/5/28 色譜分析 1 80 3)部分固定液的 McReynods常數(shù)值 固定液 X Y Z U S SE30 16 55 44 66 42 Apiezon L 32 22 15 32 42 XE60 204 381 340 493 367 XF1125 204 381 340 493 367 OV101 17 57 45 67 43 SP2100 17 57 45 67 43 QF1 144 233 355 463 305 PEG 20M 322 536 368 572 510 2022/5/28 色譜分析 1 81 4) 特征常數(shù)的應(yīng)用 1) 判斷固定液性質(zhì) (極性大小、對(duì)哪類樣品保留大 )。 2) 選擇替代品 (常數(shù)基本相同的便可替代 )。 3) 判斷峰形好壞 (在某固定相上已拖尾，則在常數(shù)值大的柱上拖尾將更嚴(yán)重 )。 4) 判斷出峰順序 (常數(shù)值大的后出峰，且兩數(shù)值之比大于 ，可認(rèn)為能很好分離 )。 5) 用于合理選擇固定相 (根據(jù)樣品中不同組分的主要性質(zhì)差異，合理選擇相應(yīng)參數(shù)差值大的固定液 )。 2022/5/28 色譜分析 1 82 固定相的優(yōu)選 固定相眾多，實(shí)驗(yàn)室不可能也沒必要配全。 推薦用固定相主要有： 2022/5/28 色譜分析 1 83 名 稱 縮寫 麥?zhǔn)? 常數(shù)和 D值 最高使 用溫度 1 角鯊?fù)? SQ 0 0 150 2 甲基硅油 SE30,OV101 205229 100 350 3 苯基 (10%)甲基聚硅氧烷 OV3 423 194 350 4 苯基 (20%)甲基聚硅氧烷 OV7 592 271 350 5 苯基 (50%)甲基聚硅氧烷 DC710,OV17 827884 377 375 6 苯基 (60%)甲基聚硅氧烷 OV22 1075 488 350 7 三氟丙基 (50%)甲基聚硅氧烷 OV10,QF1 15002550 709 275 8 ?－氰乙基 (25%)甲基聚硅氧烷 XE60 1785 821 250 9 聚乙二醇 20220 PEG20M 2308 1052 225 10 聚乙二醇二乙二酸酯 DEGA 2764 1295 200 11 聚丁二醇二乙二酸酯 DEGS 3504 1612 200 12 1,2,3三 (2氰乙氧基 )丙烷 TCEP 4145 1885 175 2022/5/28 色譜分析 1 84 鍵合固定相 以分子鍵的形式將固定液鍵合到適當(dāng)?shù)妮d體上，減少流失損失。 再適當(dāng)膠聯(lián)聚合，進(jìn)一步提高性能，尤其是對(duì)毛細(xì)管柱。 主要的鍵和體系是以 PEG系列為對(duì)象。 引入特殊基團(tuán)可提高柱選擇性 (類似于具有選擇作用的螯合樹脂 )。 2022/5/28 色譜分析 1 85 混合固定相 單一固定液不能滿足分離需要時(shí)可考慮用混合柱。 混合模式： 混合涂 混合裝 單柱串聯(lián) 前兩法的效果基本相近，較另一法好。 2022/5/28 色譜分析 1 86 混合固定相配比選擇 可用窗口法求出合適的固定液比 2022/5/28 色譜分析 1 87 混合固定相配比選擇 2022/5/28 色譜分析 1 88 程序柱 按預(yù)先設(shè)置的程序，按一定方式裝填固定相而制成的柱子。 可改變的因素有：液載比、載體粒度、裝填長(zhǎng)度。 組合恰當(dāng)，可得很好的分離效果。 2022/5/28 色譜分析 1 89 4) 固定液選用原則 “ 相似相溶原則 ” 被分離樣品為非極性物質(zhì)，一般選用非極性固定液。 被分離的樣品為極性物質(zhì)，則一般先用極性固定液。 被分離樣品為極性物質(zhì)（或易被極化物質(zhì)）和非極性物質(zhì)的混合物，一般也選用極性固定液 2022/5/28 色譜分析 1 90 4) 固定液選用原則 被分離的樣品若為形成氫鍵的物質(zhì)，一般選擇極性或氫鍵型固定液 被分離樣品為具有酸性和堿性（吡啶類）的極性物質(zhì)，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重拖尾，一般選用極性固定液，并加酸性或堿性減尾劑 2022/5/28 色譜分析 1 91 4) 固定液選用原則 被分離樣品為異構(gòu)體，一般選用強(qiáng)極性或有特殊作用力的固定液 被分離樣品為不同族的混合物，視具體情況而定，或用單一固定液，或用混合物固定液。 2022/5/28 色譜分析 1 92 5) 固定液使用中的有關(guān)問題 A． 固定液的純度和精制 固定液是一種高沸點(diǎn)的有機(jī)物 ， 由于固定液的生產(chǎn)過程 、 包裝 、 貯存和供應(yīng)等方面的問題 ， 有時(shí)會(huì)使得固定液中含有影響色譜分析的雜質(zhì) ， 即達(dá)不到要求的純度 。 如商品鄰苯二甲酸酯和磷酸二甲酯中混有酸性化合物 ， 聚酯和聚乙二醇等往往含有低聚物 。因此 ， 此類固定液在使用前必須予以精制 。 目前常用固定液精制的方法有精密分餾和氣相色譜分離純化兩種 ， 后法簡(jiǎn)便 、 快速 ， 得到的固定液純度可達(dá) %以上 ， 但需用制備色譜儀 ， 前法在實(shí)驗(yàn)室就可進(jìn)行 。 2022/5/28 色譜分析 1 93 B．固定液的最高使用溫度和最低使用溫度 固定液雖是高沸點(diǎn)有機(jī)物 ， 但也不能在太高的溫度下使用 。 該限制溫度即謂最高使用溫度 ， 它應(yīng)比相應(yīng)固定液的沸點(diǎn)低大約 150～ 200℃ 。 超過最高使用溫度可能使固定液變質(zhì) ， 產(chǎn)生流失現(xiàn)象或者縮短色譜柱的壽命 。 有的固定液使用溫度有一個(gè) “ 下限 ” ， 即最低使用溫度 。 低于此溫度 ， 固定液溶解被測(cè)組份的能力降低 ，或分離效果很差 。 如二甲基硅橡膠最低使用溫度為100－ 125℃ 、 阿匹松 L的最低使用溫度為 75℃ 、 六環(huán)聚苯醚的最低使用溫度為 75℃ 等等 。 2022/5/28 色譜分析 1 94 C. 固定液的涂漬與老化 色譜柱質(zhì)量還與固定液能否均勻分布在載體表面以及填充情況有密切的關(guān)系 。 當(dāng)選好固定液后 ， 還需要確定固定液與載體的量比 (液載比 ， 3:100到 10:100)。 固定液一般采用動(dòng)態(tài)法 涂漬 ：涂漬須在通風(fēng)柜進(jìn)行 。 稱取一定量固定液溶解在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中 (必要時(shí)可回流 )， 然后加入一定量經(jīng)過處理和篩分過的載體 ， 在適當(dāng)溫度下輕輕拍打燒杯 ， 待其中所有溶劑完全揮發(fā)后即涂漬完畢 。 2022/5/28 色譜分析 1 95 C. 固定液的涂漬與老化 涂漬完畢還需進(jìn)行 老化 處理 ， 其目的有二：徹底除去填充物中的殘余溶劑 和 某些揮發(fā)性雜質(zhì) ， 促進(jìn)固定液均勻牢固地分布于載體表面 。 老化操作通常在較低的載氣流速 、 略高于操作柱溫 ， 但又不超地固定液的最高使用溫度的條件下 ， 加熱十幾個(gè)小時(shí) ， 然后接入正常氣路 ， 直至記錄器上的基線平直 ， 就可進(jìn)行分析 。 2022/5/28 色譜分析 1 96 D. 色譜柱柱體的選擇，試漏和清洗 填充色譜柱一般是玻璃柱或不銹鋼柱(3~4mm 1~4m)， 根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件 (如柱壓柱溫 )和樣品性質(zhì) (如反應(yīng)性能 、 腐蝕性等 )選擇合適柱材 ， 現(xiàn)多為螺旋形 (螺旋直徑與柱內(nèi)徑之比一般為 15： 1到 25： 1)。 柱子使用前都需進(jìn)行試漏和清洗 。 試漏 方法：將柱出口堵死后浸在水里 ， 通氣 ，在高于操作壓力下 ， 不應(yīng)有氣泡冒出 。 柱的 清洗 與柱材有關(guān)：一般有堿洗 、 水洗 、有機(jī)溶劑洗 。 2022/5/28 色譜分析 1 97 E. 固定相的填充 一般采用泵抽法填充 ， 在柱的一端 （ 以后接檢測(cè)器那端 ） 填入少量玻璃棉后用布包緊 ， 接上真空泵抽氣 ， 另一端用小漏斗加入固定相 ， 在不斷輕輕敲擊柱身中直至填滿 。 要注意的是 ， 敲打不能過重 ， 以免載體碎裂；對(duì)涂漬低沸點(diǎn)固定液的固定相不宜用泵抽法；裝填要均勻 ，不要太松或太緊 。 2022/5/28 色譜分析 1 98 F、其他柱子 現(xiàn)在多采用毛細(xì)管柱進(jìn)行分離 ， 它的處理以后專門論述 。 2022/5/28 色譜分析 1 99 柱故障的診斷與排除 (1. 多出峰 ) 有兩種類型的附加峰 1. 即使不進(jìn)樣也會(huì)出現(xiàn)的峰 (鬼峰 ) ， 并且在色譜分析過程中也會(huì)出現(xiàn)在真實(shí)的峰之中 2. 由樣品產(chǎn)生的附加峰 2022/5/28 色譜分析 1 100 鬼峰 ? 柱頭污染 ? 烘焙色譜柱，然后做空運(yùn)行（無(wú)樣品） ? 進(jìn)樣墊流失 ?使用高質(zhì)量的產(chǎn)品 ? 進(jìn)樣口污染 ? 殘留在進(jìn)樣口或襯管中的物質(zhì) ? 載氣不純 ?使用高純度的載氣及高質(zhì)量的氣體凈化器，并定期更換 ? 載氣中雜質(zhì)與固定相發(fā)生反應(yīng) ? 若使用分離 /無(wú)分流進(jìn)樣口 ?進(jìn)樣口底部的密封墊可能會(huì)與樣品反應(yīng) ?使用精制進(jìn)口密封墊 2022/5/28 色譜分析 1 101 樣品產(chǎn)生的附加峰 ? 即使進(jìn)純樣，也會(huì)出現(xiàn)附加峰 ? 做一次空運(yùn)行 ? 如果這些峰還存在，不是由樣品產(chǎn)生的，按照前面介紹的方法檢查 ?進(jìn)樣口溫度過熱，可以導(dǎo)致樣品組分的降解 ?每次將進(jìn)樣口降低 20℃ ， 觀察峰是否仍出現(xiàn) ? 襯管與樣品起反應(yīng) ?使用脫活的襯管 ?襯管內(nèi)填充物有活性 ?更換襯管內(nèi)填充物或使用無(wú)填充物的襯管 2022/5/28 色譜分析 1 102 樣品產(chǎn)生的附加峰 ?樣品在進(jìn)樣口停留的時(shí)間太長(zhǎng) ? 增加柱流速 ?樣品組分穩(wěn)定性差 ? 盡可能降低進(jìn)樣口溫度 ? 使用脈沖式無(wú)分流或脈沖式分流進(jìn)樣 2022/5/28 色譜分析 1 103 柱故障的診斷與排除 (2. 丟失峰 ) ?進(jìn)樣口溫度太低 ? 高沸點(diǎn)的化合物不能很快地氣化 ? 增加進(jìn)樣口溫度 ?進(jìn)樣口溫度太高 ? 許多揮發(fā)性的組分在進(jìn)樣口降解 ? 降低進(jìn)樣口溫度 ?進(jìn)樣口被污染 ? 進(jìn)樣口的污染物與樣品發(fā)生反應(yīng) ? 清洗進(jìn)樣口，更換襯管和進(jìn)樣墊 ?襯管有活性 ? 使用脫活的襯管 色譜圖中沒有出現(xiàn)你希望得到的樣品組分峰 2022/5/28 色譜分析 1 104 柱故障的診斷與排除 ?柱過載 ? 將樣品稀釋 10倍重新進(jìn)樣 ?使用較厚液膜但固定液相同的色譜柱 ?減少進(jìn)樣量 ? 小體積進(jìn)樣 ? 增加分流比 ?可能是幾個(gè)未分離的色譜峰 ? 將柱溫降低 20℃ 再進(jìn)樣 ?局部的分離可以顯示其它額外的樣品組分 峰型不好 2022/5/28 色譜分析 1 105 柱故障的診斷與排除 ?使用較長(zhǎng)的色譜柱 ?試一試不同選擇性或不同極性的柱子 ? 如將 HP1換成 HP5 ? 如將 HP5換成 HP35或 HP50+ ? 例如半揮發(fā)性的苯甲酸（色譜性能不好） 峰型不好 2022/5/28 色譜分析 1 106 柱故障的診斷與排除 峰型很差 ?合并的峰（未分離的峰） ?將柱溫降低 2030℃ ?在進(jìn)樣口的底部安裝柱子的地方安裝 絕緣帽 ?將進(jìn)樣口溫度增加 2030℃ ?檢查樣品與溶劑的選擇是否正確 ?對(duì)極性的化合物使用極性的溶劑 峰頂分叉（雙肩峰） 106 2022/5/28 色譜分析 1 107 柱故障的診斷與排除 峰型很差 檢測(cè)器過載 減少進(jìn)樣量或?qū)悠废♂?10倍 或者使用較大的分流比 稀釋樣品可以達(dá)到較好的效果 峰頂分叉（雙肩峰） 107 2022/5/28 色譜分析 1 108 色譜柱安裝位置引起的問題 ?色譜柱到檢測(cè)器安裝位置不正確 。 使其不能到達(dá) FID噴嘴 ?色譜柱到進(jìn)樣口安裝位置不正確 . 使其不能到達(dá)進(jìn)樣口 ?色譜柱到進(jìn)樣口及檢測(cè)器的位置安裝正確 108 2022/5/28 色譜分析 1 109 色譜柱安裝到進(jìn)樣口 評(píng)定因素 ?安裝深度 柱到針的間隙 ? 按照廠方的介紹 , ? 在進(jìn)樣針頭到柱保留 12厘米的間隙 ?對(duì)分析物和樣品基質(zhì)選擇適用的襯管 ?使用專用的柱切割器 ?保證所有的柱接頭及其它接口不漏 高效液相色譜法的相關(guān)情況 2022/5/28 色譜分析 1 111 液相色譜柱的保養(yǎng) 柱的穩(wěn)定性與固定相類型及使用情況有關(guān) 。如流動(dòng)相中鹽類的存在會(huì)使鍵合相柱的性能衰退；以 SiO2為基質(zhì)的固定相 ， 過程隨溫度和 pH(8)增加而加速 。 一根柱子使用是否得當(dāng) ， 直接影響它的柱效和壽命 。