高效液相色譜分析ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-13 09:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 五、凝膠色譜 ? 凝膠過濾色譜（ gel filtration chromatography, GFC）： 以水或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。主要適合于 水溶性高分子 的分離。 ? 凝膠滲透色譜（ gel permeation chromatography, GPC）： 以有機溶劑作流動相的凝膠色譜法。主要適合于 脂溶性高分子的分離 。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子，所以 GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的測定。 溶劑 色譜泵 自動進樣器 HPLC色譜柱 檢測器 廢液 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 第四節(jié) 高效液相色譜儀 高效液相色譜儀由 高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng) 等五大部分組成。 分析前，選擇適當?shù)纳V柱和流動相，開泵，沖洗柱子，柱子達到平衡而且基線平直。 用微量注射器把樣品注入進樣口，流動相把試樣帶入色譜柱進行分離，分離后的組分依次流入檢測器，最后和洗脫液一起排入廢液缸。 當有樣品組分流過檢測器時，檢測器把組分濃度轉變成電信號，經(jīng)過放大，用記錄器記錄下來得到色譜圖。 色譜圖是 定性、定量和評價柱效高低 的依據(jù)。 (1) 高壓輸液泵 A、 主要部件之一 ， 壓力： 15～ 35MPa。 B、 應具有壓力平穩(wěn) 、 脈沖小 、 流量穩(wěn)定 、 可調(diào) 、 耐腐蝕等特性 (2) 脫氣裝置 流動相 為什么要脫氣 流動相溶液往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡。 ? 氣泡進入檢測器后會在色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪音峰。 ? 氣泡進入流路或色譜柱中會使流動相的流速變慢或出現(xiàn)流速不穩(wěn)定，致使基線起伏。 ? 氣泡一旦進入色譜柱，排出這些氣泡則很費時間。 ? 溶解氣體還可能引起某些樣品的氧化或使溶液 pH值發(fā)生變化。 ? 脫氣方法 離線超聲波振蕩脫氣和在線真空脫氣。 a. 超聲波振蕩脫氣： 將配制好的流動相連容器放入超聲水槽中脫氣 1020min。 這種方法比較簡便，又基本上能滿足日常分析操作的要求，所以，目前仍廣泛采用。 b. 真空脫氣裝置 ? 將流動相通過一段由多孔性合成樹脂膜制造的輸液管，該管外有真空容器，真空泵工作時，膜外側被減壓，分子量小的氧氣、氮氣、二氧化碳就會從膜內(nèi)進入膜外而被脫除。 ? 一般的真空脫氣裝置有多條流路，可同時對多個溶液進行脫氣。 ? 為什么要進行梯度洗脫？ 在進行多成分的復雜樣品的分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，而后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰型較差。 ? 為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并達到相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。 (3) 梯度洗脫 ? 梯度洗脫操作 在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效果不大，而且還會帶來一些不利影響，因此，液相色譜中通常所說的梯度洗脫是指 流動相梯度 ， 即在分離過程中改變流動相的組成或濃度 。 ?定義：流動相中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定的程序連續(xù)改變流動相的配比和極性，以提高分離效果。 ?例如，甲醇 水 40:60到 45:55到 50:50 ?優(yōu)點： 分離時間縮短，分辨能力增加，峰形改善 梯度洗脫裝置 高壓梯度 : 利用兩臺高壓泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。 低壓梯度 : 一臺高壓泵 , 通過比例調(diào)節(jié)閥 , 將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。 (5) 高效分離柱 ? 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑 1～ 6 mm（常用 ）， 柱長 5～ 40 cm（常用 15cm或 25cm）。 ? 發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 ? 與 GC色譜柱不同。 a. 紫外檢測器 基于 LambertBeer定律 ， 即被測組分對紫外光或可見光具有吸收 ， 且吸收強度與組分濃度成正比 。 應用最廣 ， 對大部分有機化合物有響應 。 特點： 靈敏度高； 線形范圍高； 流通池可做的很小 （ 1mm 10mm ， 容積 8μL） ； 對流動相的流速和溫度變化不敏感； 波長可選 ， 易于操作 。 (6) 檢測器 b. 熒光檢測器 （ Fluorescence detector） 高靈敏度 、 高選擇性； 對多環(huán)芳烴 ， 維生素 B、黃曲霉素 、 卟啉類化合物 、農(nóng)藥 、 藥物
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1