高效液相色譜(編輯修改稿)
2024-08-28 17:58 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 . 色譜過(guò)程熱力學(xué) 色譜保留與選擇性 (1) 容量因子 ? k’ = (tRt0)/t0 ? = 組分在固定相中的量 / 組分在流動(dòng)相中的量 ? 死時(shí)間 t0 的測(cè)定 ? 同系物法 ? 標(biāo)志物法（反相色譜：尿嘧啶、流動(dòng)相、鹽） (2) 保留的理論基礎(chǔ) ? 平衡常數(shù) K = 組分在固定相中的濃度 / 組分在流動(dòng)相中的濃度 = βk’ ?β = 色譜柱內(nèi)流動(dòng)相所占體積 / 固定相所占體積 ? k’ = K/β ? 直接與組分的熱力學(xué)常數(shù)和分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，也與固定相、流動(dòng)相的性質(zhì)有關(guān) (3) 溶劑強(qiáng)度 （強(qiáng) ?弱） 還與組分性質(zhì)有關(guān) ！！ 反相液相色譜 甲醇、乙腈、四氫呋喃、水 正相液相色譜（相反） 水、甲醇、丙酮、氯仿、苯、己烷 溶劑的強(qiáng)度和極性 溶劑的選擇性 Snyder 以溶劑和樣品分子之間的作用力作為溶劑選擇性的依據(jù)，根據(jù)溶劑行為的相似性將其分成8組 ?處于同一組的溶劑，分離中有相似的選擇性；而處于不同組的溶劑，其選擇性差別較大 ?正相色譜中，固定相是極性的，所以增加極性參數(shù) P’，洗脫能力增加 ?反相色譜中，固定相是非極性的，所以增加極性參數(shù) P’，洗脫能力降低 (4) 保留值與流動(dòng)相組成 ? 液固色譜中， k’對(duì)溫度的變化不如氣相色譜敏感，通常不考慮。因此，在流動(dòng)相線(xiàn)速確定后，影響分離效果合分離時(shí)間的主要因素就是流動(dòng)相組成。通過(guò)統(tǒng)計(jì)熱力學(xué)的方法可以導(dǎo)出在二元流動(dòng)相體系中組分容量因子 k’與強(qiáng)溶劑的濃度 CB之間存在如下關(guān)系： ? lnk’ = a + blnCB + cCB ? 在包含強(qiáng)溶劑 B B2的三元流動(dòng)相體系中 ? lnk’ = a + b1lnCB1 + c1CB1+ b2lnCB2 + c2CB2 ? 式中 a, b, c都可近似地視為常數(shù)。 色譜分離條件的選擇 混合物的分離 (1) 優(yōu)化參數(shù)和優(yōu)化指標(biāo) ? 優(yōu)化色譜參數(shù)：選擇合適的檢測(cè)器、分離模式、色譜柱、流動(dòng)相組成等 ? 在高效液相色譜中實(shí)際上主要是流動(dòng)相組成，包括流動(dòng)相中各種有機(jī)溶劑的濃度、緩沖液的種類(lèi)、濃度和 pH、添加劑的種類(lèi)和濃度等。 ? 優(yōu)化指標(biāo)：分離度、選擇性、總分離效能指標(biāo)、各種色譜響應(yīng)函數(shù)和色譜優(yōu)化函數(shù) (2) 液相色譜流動(dòng)相組成優(yōu)化方法 a 計(jì)算化學(xué)的方法 （數(shù)學(xué)優(yōu)選法） ? 三角形法（主要是四面體法） ? 圖解法（窗口圖形法、重疊分辨率圖法等） ? 直接法（單純形法、復(fù)合形法、重復(fù)設(shè)計(jì)法等） b 基于色譜理論的方法 ? 保留值預(yù)測(cè) ? 譜圖模擬 3 儀器系統(tǒng)與色譜柱 高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)示意見(jiàn)圖，一般可分為 4個(gè)主要部分： 高壓輸液系統(tǒng)，進(jìn)樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)。此外還配有 輔助裝置 ：如梯度淋洗，自動(dòng)進(jìn)樣及數(shù)據(jù)處理等。 其工作過(guò)程如下 ： 首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過(guò)進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè)器送出的信號(hào)記錄下來(lái)，由此得到液相色譜圖。 高壓輸液系統(tǒng) 由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細(xì)，因此對(duì)流動(dòng)相阻力很大，為使流動(dòng)相較快流動(dòng)，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。它是高效液相色譜儀最重要的部件，一般由 儲(chǔ)液罐 高壓輸液泵 過(guò)濾器 壓力脈動(dòng)阻力器等組成， (1) 輸液系統(tǒng)與流動(dòng)相 ? A 流動(dòng)相、脫氣及貯液裝置 溶劑基本要求：不損害柱的穩(wěn)定性（液固吸附色譜中的含水溶劑會(huì)改變活性，使用鍵合硅膠固定相時(shí)，流動(dòng)相的 pH應(yīng)在 28之間）；有足夠的純度（防止柱被污染，提高檢測(cè)靈敏度）；與檢測(cè)器匹配（區(qū)別流動(dòng)相與樣品，提高檢測(cè)靈敏度）；對(duì)樣品有一定的溶解能力（防止樣品沉積的柱頭上）；制備色譜中要有利于樣品的回收（易于蒸發(fā)除去，堿性氧化鋁柱不用丙酮，避免羥醛縮合） 溶劑過(guò)濾 ? 原因： ? 防止磨損柱塞泵的單向閥和密封圈（影響精
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