項(xiàng)目層析技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-07 08:39本頁(yè)面
【正文】 子中含有可解離的基團(tuán) .含有酸性可解離基團(tuán)的稱為 陽(yáng)離子交換樹脂 ，可解離出 H+，含有堿性可解離基團(tuán)的稱 為 陰離子交換樹脂 ，可解離出 OH 離子交換層析法 離子交換層析的基本原理 + + + + + + — — — + + + + + ?若選擇陽(yáng)離子交換樹脂，則帶正電荷的物質(zhì)與 H+發(fā)生交換而結(jié)合在樹脂上。若選擇陰離子交換樹脂，則帶負(fù)電荷的物質(zhì)可與 OH發(fā)生交換而結(jié)合在樹脂上。 ?物質(zhì)在樹脂上結(jié)合的牢固程度即 親和力大小 有差異，因此選用適當(dāng)?shù)?洗脫液 便可將混合物中的組分逐個(gè)洗脫下來(lái)，達(dá)到分離純化的目的。 + + 原理 利用生物大分子間 特異的親和能力 來(lái)純化生物大分子 如：抗原和抗體 ； 酶和底物或輔酶或抑制劑 ； 激素和受體； RNA和其互補(bǔ)的 DNA等 。 ? 將待純化物質(zhì)的 特異配體 通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng) 共價(jià) 的連接到 載體 上 ， 待純化的物質(zhì)可被配體吸附 ， 雜質(zhì)則不被吸附 ， 通過(guò) 洗脫雜質(zhì) 即可除去 。 被結(jié)合的物質(zhì)再用含 游離的相應(yīng)配體溶液 把它從柱上洗脫下來(lái) 。 親和層析法 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 免疫親和層析柱（ IAC） ? 近年來(lái)免疫親和層析柱 （ IAC）開始被用于有選擇性地從復(fù)雜基體樣本中提取 （ 凈化 ）小分子待測(cè)物 ， 如藥物 、 激素 、 農(nóng)藥和真菌毒素等 。 ? IAC技術(shù)簡(jiǎn)化了小分子待測(cè)物樣品凈化程序 ， 避免了大量有毒 、 有異味的有機(jī)溶劑的使用 。 吸附原理 ? 待測(cè)物被柱子中 免疫吸附劑上的抗體 所吸附 ， 通過(guò) 淋洗 除去柱上吸附的雜質(zhì) ， 最后待測(cè)樣品被一種 易蒸發(fā)的溶劑 洗脫下來(lái) 。 用 IAC技術(shù) ， 樣品通常只經(jīng)過(guò)一次萃取就可直接用于薄層色譜法 、 熒光光度法 、 HPLC或 GCMS測(cè)定 ， 也可用免疫學(xué)方法檢測(cè) 。 工作原理 高壓液相層析（ HPLC） ? 特點(diǎn) ①使用的固相支持劑顆粒很細(xì)，表面積很大 ,因而分辨率很高。 ②溶劑系統(tǒng)采用高壓，因此洗脫速度增大。 許多類型的柱層析都可用 HPLC來(lái)代替，如分配層析、離子交換層析、吸附層析、凝膠過(guò)濾等。
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