吸附層析ppt課件(2)-資料下載頁(yè)
2025-05-12 02:01本頁(yè)面
【正文】 響因素較多，需要有較高的專業(yè)知識(shí)第三章 吸附層析(absorptionchromatography)第一節(jié) 吸附柱層析? 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構(gòu)成柱狀的一種層析方法。? 常用的吸附劑： 極性 羥基磷灰石、硅膠、氧化鋁、人造沸石等 非極性 活性炭等。一、基本原理 吸附劑的表面存在著許多隨機(jī)分布的吸附位點(diǎn)。這些位點(diǎn)通過(guò)范德華力和靜電引力與蛋白質(zhì)和核酸等生物分子結(jié)合，其結(jié)合力的大小與各種生物分子的結(jié)構(gòu)和吸附劑的性質(zhì)有密切關(guān)系。圖 吸附柱層析原理示意圖 A、 B混合樣品 ， A與 B開(kāi)始分離 ， A與 B已經(jīng)分離二、吸附劑1．吸附劑的選擇吸附劑應(yīng)具備性能 ：表面積大、顆粒均勻、吸附選擇性好、穩(wěn)定性強(qiáng)和成本低廉等。2.吸附劑的性質(zhì)羥基磷灰石 (HA)硅膠三、洗脫劑合適的洗脫劑應(yīng)符合下列條件 ：? ① 純度較高? ② 穩(wěn)定性好? ③ 能較完全洗脫下所分離的成分? ④ 粘度小? ⑤ 易和所需要的成分分開(kāi)。1.純化生命物質(zhì)四、應(yīng)用圖 天然的雙鏈 (ds)和熱變性單鏈 (ss)小牛胸腺DNA在 HTP層析柱的分離圖譜2.分離蛋白質(zhì)的亞基? 一般蛋白質(zhì)經(jīng) SDS或 TritonX—100 等去污劑處理后，會(huì)產(chǎn)生分子量不同的蛋白質(zhì)亞基。這些物質(zhì)可通過(guò)吸附柱層析方法得到分離 (見(jiàn)圖 )。圖 14C組氨酸標(biāo)記的免球蛋白亞基在 HA層析柱的分離圖譜第二節(jié) 薄層層析Thinlayerchromatography,TLC? 薄層層析 (thinlayerchromatography,TLC)是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動(dòng)相的一種層析方法。? 其基本原理和柱層祈、紙層折比較相近。 ? 這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進(jìn)行展層。分類? 吸附薄層層析 (吸附劑為固定相 )? 分配薄層層析 (固定在支持劑上的水溶液或有機(jī)溶劑為固定相 )? 離子交換薄層層析 (離子交換劑為固定相 )等表 薄層層析常用的基質(zhì)與紙層析比薄層層析多一步薄層板的制作：與紙層析比薄層層析多一步薄層板的制作： 將支持劑均勻地涂布在玻璃板上而成薄層板。所將支持劑均勻地涂布在玻璃板上而成薄層板。所用玻璃板要求表面平整、光滑，用前應(yīng)洗凈、干燥。用玻璃板要求表面平整、光滑，用前應(yīng)洗凈、干燥。 薄層板常用的制作方法有：薄層板常用的制作方法有： 浸涂法：、浸涂法： 將玻璃板在調(diào)好的支持劑漿液中浸一下，使?jié){液將玻璃板在調(diào)好的支持劑漿液中浸一下，使?jié){液在玻璃板上形成薄層。在玻璃板上形成薄層。 噴涂法：、噴涂法： 用噴霧器將調(diào)好的漿液噴在玻璃板上，形成薄層。用噴霧器將調(diào)好的漿液噴在玻璃板上，形成薄層。 傾斜涂布法（傾淌法）、傾斜涂布法（傾淌法） ：： 將調(diào)好的支持劑漿液倒在玻璃板上，然后將玻璃板將調(diào)好的支持劑漿液倒在玻璃板上，然后將玻璃板前后左右傾斜，使支持劑漫布于整塊玻璃板上而形成前后左右傾斜，使支持劑漫布于整塊玻璃板上而形成薄層。薄層。 推鋪法：、推鋪法： 在一根玻璃棒的兩端適當(dāng)距離處分別繞幾在一根玻璃棒的兩端適當(dāng)距離處分別繞幾圈膠布條，膠布條的圈數(shù)視所需薄層層析厚度圈膠布條，膠布條的圈數(shù)視所需薄層層析厚度而定，然后把準(zhǔn)備好的支持劑倒在玻璃板上的而定，然后把準(zhǔn)備好的支持劑倒在玻璃板上的一端，用玻璃棒壓在玻璃板上，將支持劑均勻一端，用玻璃棒壓在玻璃板上，將支持劑均勻地向另一個(gè)方向推動(dòng)，而成為一薄層。地向另一個(gè)方向推動(dòng)，而成為一薄層。 薄層層析的其它操作方法與紙層析薄層層析的其它操作方法與紙層析類似：點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色、定性與類似：點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色、定性與定量分析。定量分析。
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