吸附層析ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-12 02:01本頁面
【正文】 響因素較多，需要有較高的專業(yè)知識第三章 吸附層析(absorptionchromatography)第一節(jié) 吸附柱層析? 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱狀的一種層析方法。? 常用的吸附劑： 極性 羥基磷灰石、硅膠、氧化鋁、人造沸石等 非極性 活性炭等。一、基本原理 吸附劑的表面存在著許多隨機分布的吸附位點。這些位點通過范德華力和靜電引力與蛋白質和核酸等生物分子結合，其結合力的大小與各種生物分子的結構和吸附劑的性質有密切關系。圖 吸附柱層析原理示意圖 A、 B混合樣品 ， A與 B開始分離 ， A與 B已經分離二、吸附劑1．吸附劑的選擇吸附劑應具備性能 ：表面積大、顆粒均勻、吸附選擇性好、穩(wěn)定性強和成本低廉等。2.吸附劑的性質羥基磷灰石 (HA)硅膠三、洗脫劑合適的洗脫劑應符合下列條件 ：? ① 純度較高? ② 穩(wěn)定性好? ③ 能較完全洗脫下所分離的成分? ④ 粘度小? ⑤ 易和所需要的成分分開。1.純化生命物質四、應用圖 天然的雙鏈 (ds)和熱變性單鏈 (ss)小牛胸腺DNA在 HTP層析柱的分離圖譜2.分離蛋白質的亞基? 一般蛋白質經 SDS或 TritonX—100 等去污劑處理后，會產生分子量不同的蛋白質亞基。這些物質可通過吸附柱層析方法得到分離 (見圖 )。圖 14C組氨酸標記的免球蛋白亞基在 HA層析柱的分離圖譜第二節(jié) 薄層層析Thinlayerchromatography,TLC? 薄層層析 (thinlayerchromatography,TLC)是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質為固定相，以液體為流動相的一種層析方法。? 其基本原理和柱層祈、紙層折比較相近。 ? 這種層析方法是把吸附劑等物質涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進行展層。分類? 吸附薄層層析 (吸附劑為固定相 )? 分配薄層層析 (固定在支持劑上的水溶液或有機溶劑為固定相 )? 離子交換薄層層析 (離子交換劑為固定相 )等表 薄層層析常用的基質與紙層析比薄層層析多一步薄層板的制作：與紙層析比薄層層析多一步薄層板的制作： 將支持劑均勻地涂布在玻璃板上而成薄層板。所將支持劑均勻地涂布在玻璃板上而成薄層板。所用玻璃板要求表面平整、光滑，用前應洗凈、干燥。用玻璃板要求表面平整、光滑，用前應洗凈、干燥。 薄層板常用的制作方法有：薄層板常用的制作方法有： 浸涂法：、浸涂法： 將玻璃板在調好的支持劑漿液中浸一下，使?jié){液將玻璃板在調好的支持劑漿液中浸一下，使?jié){液在玻璃板上形成薄層。在玻璃板上形成薄層。 噴涂法：、噴涂法： 用噴霧器將調好的漿液噴在玻璃板上，形成薄層。用噴霧器將調好的漿液噴在玻璃板上，形成薄層。 傾斜涂布法（傾淌法）、傾斜涂布法（傾淌法） ：： 將調好的支持劑漿液倒在玻璃板上，然后將玻璃板將調好的支持劑漿液倒在玻璃板上，然后將玻璃板前后左右傾斜，使支持劑漫布于整塊玻璃板上而形成前后左右傾斜，使支持劑漫布于整塊玻璃板上而形成薄層。薄層。 推鋪法：、推鋪法： 在一根玻璃棒的兩端適當距離處分別繞幾在一根玻璃棒的兩端適當距離處分別繞幾圈膠布條，膠布條的圈數視所需薄層層析厚度圈膠布條，膠布條的圈數視所需薄層層析厚度而定，然后把準備好的支持劑倒在玻璃板上的而定，然后把準備好的支持劑倒在玻璃板上的一端，用玻璃棒壓在玻璃板上，將支持劑均勻一端，用玻璃棒壓在玻璃板上，將支持劑均勻地向另一個方向推動，而成為一薄層。地向另一個方向推動，而成為一薄層。 薄層層析的其它操作方法與紙層析薄層層析的其它操作方法與紙層析類似：點樣、展開、顯色、定性與類似：點樣、展開、顯色、定性與定量分析。定量分析。
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