液相層析色譜技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-04 05:02本頁面
【正文】 析法和生物活性測定法 等。 ? 如果某一化合物具有特征性物理特性，對可見光或紫外光有吸收，如蛋白質(zhì)在 280nm， 核酸在 260nm處有最大的吸收?？捎煤怂岚踪|(zhì)檢測儀。 ? 洗脫液的合并方法對目的物質(zhì)量和產(chǎn)量有較大的影響。 ? 欲得高純度的化合物，一般根據(jù)洗脫峰位置收集合并較窄的部分； ? 欲得產(chǎn)量較多目的物，則合并較寬部分。 九、洗脫峰的純度鑒定 ? 由于檢測系統(tǒng)的分辨率有限所以一個對稱的洗脫峰并不一定代表一個純凈的組分。 ? 如果洗脫峰峰形不對稱，或出現(xiàn)“肩” (shoulder)， 則表示混有雜質(zhì)。 ? 對在一個特定的柱層析分離條件下顯示出的每個峰要用幾個純度標(biāo)準 (一般 23個高分辨率方法 )來檢驗，才能確定它的均一性。 ? 例如，可采用 SDS電泳法、等電聚焦法、高效液相層析法和測定 N末端氨基酸殘基方法等。 十、脫鹽和濃縮 ? 洗脫峰在純度鑒定的基礎(chǔ)上，將同一組分合并。 ? 若欲得到某一產(chǎn)品，有必要依次經(jīng)過減壓薄膜濃縮法或超濾 (去鹽、去水 )，透析去鹽 ? 再用冰凍干燥或有機溶劑沉淀等方法處理，得到干粉或沉淀。 ? 科研、生產(chǎn)中要得到高純度組分，往往要經(jīng)過幾次柱層析 ? 每次柱層析后，某一峰的洗脫液可依次用透析法除鹽 ? 超濾或減壓薄膜濃縮法將樣品濃縮到一定體積后，再上第二次柱。 十一、凝膠的再生及保存 ? 再生 (一般無需做再生處理 ) ? 用過的凝膠經(jīng) NaOH(含 NaCI)混合液浸泡 ? 當(dāng)污染嚴重時用 ? 防霉 ? %疊氮鈉或 %雙氯苯雙胍己烷 ? 凝膠的保存方法： ? 濕態(tài) 加入防腐劑后低溫保存（ 4 ℃ ） ? 半收縮態(tài) 水洗凈后濾干，用 60%70%的乙醇洗滌，使凝膠體積縮小，低溫保存。 ? 干態(tài) ? 水洗凈后濾干，用 60%,70%,90%, 95%,的乙醇逐步脫水，再用乙醚洗去乙醇，干燥 保存。切忌開始就用濃乙醇 ,防止結(jié)塊。
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