高效液相色譜hplc簡(jiǎn)介-資料下載頁(yè)
2025-04-30 18:19本頁(yè)面
【正文】 能 是同樣的組份 ? 保留時(shí)間不同， 肯定 不是同樣的組份 進(jìn)一步的確認(rèn) (定性 ) ? 標(biāo)準(zhǔn)加入 ? 同時(shí)用其他方法 – 其他色譜方法（改變機(jī)理，如：用不同的色譜柱） – 其他檢測(cè)器 ? PDA，光譜圖比較、譜庫(kù)檢索 ? MS，質(zhì)譜圖解析、譜庫(kù)檢索 – 其他儀器方法 HPLC定量分析的常用術(shù)語 (2) ? 積分 (Integrity):由計(jì)算機(jī)對(duì)色譜峰進(jìn)行峰面積測(cè)量的計(jì)算過程 ? 定量限 :可以準(zhǔn)確定量的樣品最低量 ,一般要求色 譜峰的 S/N＞ 10:1 ? 校正曲線 (Calibration Curve):組分含量對(duì)響應(yīng)值的線性曲線 ,由已知量的標(biāo)準(zhǔn)物建立 ,用于測(cè)定待測(cè)物的未知含量 常用的定量方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 ,分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法 : 外標(biāo)法 在液相色譜中用得最多 內(nèi)標(biāo)法 準(zhǔn)確，但是麻煩 在標(biāo)準(zhǔn)方法中用得最多 外標(biāo)法定量（一） ? 配制一系列已知濃度的標(biāo)樣 外標(biāo)法定量（二） ? 采集不同濃度 標(biāo)樣的色譜圖 ? 積分 ,按外標(biāo)法 定量計(jì)算 ,建立 標(biāo)準(zhǔn)曲線 0 50 100 150 200 25001,0002,0003,0004,0005,000樣品濃度響應(yīng)值峰面積 ( )標(biāo)準(zhǔn)曲線 MinutesMinutesMinutes內(nèi)標(biāo)法定量（一） ? 配制一系列濃度的標(biāo)樣，其中加有內(nèi)標(biāo)樣 內(nèi)標(biāo)法定量（二） ? 采集不同濃度 標(biāo)樣的色譜圖 ? 積分 ,按內(nèi)標(biāo)法 定量計(jì)算 ,建立 標(biāo)準(zhǔn)曲線 0 . 0 00 . 2 00 . 4 00 . 6 00 . 8 01 . 0 01 . 2 01 . 4 01 . 6 01 . 8 02 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0v o l t sM i n u t e sM e t h y l P a r a b e nE t h y l P a r a b e nP r o p y l P a r a b e nB u t y l P a r a b e n0 50 10 15 200 25001020304050樣品濃度標(biāo)樣峰面積內(nèi)標(biāo)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線 內(nèi)標(biāo)法定量（三） ? 對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求 – 化學(xué)結(jié)構(gòu)與待測(cè)組分相似 (同系物、異構(gòu)體 ) – 在樣品中不存在 – 不與樣品中組份發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng) – 保留值與待測(cè)組分接近 – 濃度（響應(yīng)值）與待測(cè)組分相當(dāng) – 其色譜峰與其它色譜峰分離好 校正曲線的檢測(cè)范圍 ? 校正曲線只有在建立這條曲線的濃度范圍內(nèi)有效 ， 高或低于這些點(diǎn)都可能引起計(jì)算錯(cuò)誤 最低濃度標(biāo)樣最高濃度標(biāo)樣所希望的檢測(cè)范圍線性問題靈敏度問題檢測(cè)器響應(yīng)樣品濃度樣品分析方法介紹 1，流動(dòng)相的準(zhǔn)備 流動(dòng)相的選擇 有機(jī)相（甲醇、乙腈）與水（去離子水、緩沖溶液） 流動(dòng)相的過濾 用孔徑為 m濾膜過濾除去固體顆粒雜質(zhì)。 流動(dòng)相的脫氣 超聲脫氣、吹氦脫氣、加熱回流法、抽真空脫氣法、在線真空脫氣法。 2，樣品的準(zhǔn)備 稱量、用流動(dòng)相超聲溶解、調(diào) PH、去除蛋白、離心、過濾。 流動(dòng)相及樣品的準(zhǔn)備 流動(dòng)相過濾器 樣品過濾器 分析方法的設(shè)定 流動(dòng)相的配比及流量 選擇何種有機(jī)相，純水或緩沖溶液，有機(jī)相與水相的比例，流動(dòng)相的總流量。 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 通過測(cè)定被分析樣品的最大吸收波長(zhǎng)（紫外吸收檢測(cè)器）。 是否采用梯度洗脫，確定起始配比（如 20∶80) 及終點(diǎn)配比 (如 80∶20) 。 樣品的分析 1, 選定分析條件，走基線； 2, 待基線平穩(wěn)后，發(fā)出進(jìn)樣指令； 3, 用進(jìn)樣針吸取已過濾好的定量樣品； 4, 進(jìn)樣分析，獲得色譜圖及分析結(jié)果； 5, 如譜圖效果不佳，則改變條件后繼續(xù)分析 。
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