1120高效液相色譜c-資料下載頁
2025-08-16 00:56本頁面
【正文】 VM＋ VS 樣品分子 完全滲透 （ 自由擴散 ） ； 182。 0 Kd 1, VM Ve VM＋ VS 樣品分子 選擇性滲透 , 樣品組分按它們的分子大小被分離 。 出峰順序為從大到小 ,均在溶劑峰之前流出柱子 。 思考： 1）排阻色譜的出峰順序？ 2）洗脫溶劑對分離是否有影響？ 在排阻色譜中 ， 選擇性僅與分子大小的差異有關(guān) 。要改進分離度只能靠凝膠的孔徑大小和孔徑分布的最佳化來實現(xiàn) 。 由懸浮聚合產(chǎn)生的均勻球型微粒能提供高的柱效率 。與其它色譜的最大的區(qū)別為洗脫出的組分峰寬相等 。 排阻色譜 (SEC)— 色譜柱校正曲線 Eluent : THF （ 2） 分離模型 （ 自學(xué) ） ：所謂的分離機理就是根據(jù)一定的物理模型 , 用分子參數(shù)和柱結(jié)構(gòu)參數(shù)來計算 Ve和 K。 目前有三種分離理論： ① 平衡理論 ：認(rèn)定分子擴散進入填料顆粒的孔中并再出來所需的時間遠小于溶質(zhì)區(qū)段在此停留的時間 , 溶質(zhì)分子出入孔達到了平衡 。 在其它形式的液相色譜中 ， 溶質(zhì)在流動相和固定相之間進行分配 。 不管是吸附或分配都涉及到兩相之間的移動 ， 伴隨著分子間和實際存在的熱焓變化 ， 而熵在這種色譜分離過程中的變化十分小 ， 常常忽略不計 。 由于 ΔH 一般為負(fù)值 ， 因此K值大于 1， 即溶劑峰先于溶質(zhì)峰流出 。 在體積排阻色譜中主要是熵的變化， ΔH≈0 ，所以 RSddKRSKln????? 排阻色譜運行時 ， 溶質(zhì)在填料微孔中的流動有一定的限制 ， 因此 ， 溶質(zhì)的滲透伴隨著熵的降低 。由于溶質(zhì)峰是先于溶劑峰洗脫 ， Kd值自然小于 1，而且是一個不受溫度影響的參數(shù) 。 ΔS 對一切溶質(zhì)均為負(fù)值 ， 同時在分離過程中可以控制 。 ② 限制擴散理論 ：認(rèn)為分離是由不同尺寸的聚合物分子在往孔中擴散時其擴散速度的不同決定的 。 ③ 流動分離理論 ：速度的流型分布決定分離 。 （ 3）聚合物在體積排阻色譜上的分離 （自學(xué)） 體積排阻色譜洗脫的體積之差取決于已知溶質(zhì)分子量的校正曲線 ， 這一校正曲線可以近似地看成是一個直線方程： )VDe x p (DM E21 ??E21 VDDlnMln ??212E21E D)M/Ml n (VDMlnMlnV ???? 或221212s D4Mln)(D2)M/Ml n (R???????式中 ， D1表示校正曲線的截距 ， D2表示校正曲線的斜率 ，σ 表示標(biāo)準(zhǔn)偏差 。 12EMW V)N/V(M4Rlg ??式中 ， M代表計算曲線的斜率 ， VE為組分的洗脫體積 ， VI是孔體積 ， N是理論塔板數(shù) 。 這一方程可以比較理想地用來描述排阻色譜的分離度 。 實驗得出均數(shù)分子量和重均分子量分別為： ??????EVE21EWE21EEn)VDe x p (DFVM)]VDe x p (D/FV[V1M實驗實驗公式中 MW12 RMM ? ， 定義為最小分離分子量之比，是排阻 色譜中非常重要的參數(shù)。一般情況下 分子量測量實驗曲線 2．凝膠填料的選擇與匹配 凝膠是排阻色譜的核心 , 是產(chǎn)生分離的基礎(chǔ) , 進行排阻色譜實驗的重要一環(huán)是選擇和搭配具有不同孔徑及色譜性能良好的凝膠 。 （ 1） 凝膠的分類 ① 有機凝膠：交聯(lián)聚苯乙烯 、 交聯(lián)聚乙酸乙烯酯 、交聯(lián)葡聚糖等 。 其特點是熱穩(wěn)定性 、 機械強度和化學(xué)惰性差 , 凝膠易老化 , 所以對使用條件要求較嚴(yán)格 。 ② 無機凝膠：多孔硅膠和多孔玻璃 。 （ 2） 凝膠的選擇 根據(jù)凝膠的色譜指標(biāo) , 即 滲透極限 和 分離范圍 進行選擇 。 實際使用時 , 可采用搭配柱子的方法 , 將不同規(guī)格的凝膠柱串聯(lián)起來 , 使分子量 淋出體積曲線的線性分布與待測樣品的分子量相當(dāng) , 根據(jù)樣品的不同和要求不同 , 決定采用那種凝膠和用幾根柱 。 國產(chǎn)交聯(lián)聚苯乙烯凝膠特性見下表： 凝膠型號 滲透極限 分離范圍 NGX1 5E3 1E2~5E3 NGX2 2E2~ NGX3 4E4 5E2~4E4 NGX4 7E3~ NGX5 1E4~ NGX6 5E4~ NGX7 3E6 1E5~3E6 （ 3） 流動相 在凝膠色譜實驗中 , 溶劑的作用原則上沒有其他液相色譜重要 。 試樣的分離并不依賴于溶劑與試樣間的相互作用力 。 溶劑的選擇主要是從對樣品的溶解能力 , 溶劑與儀器的匹配以及實驗結(jié)果處理的方便來考慮的 。 3．應(yīng)用 排阻色譜是一種 廣譜的分離方法 , 可用于分離那些因溶解度 、 極性吸附或離子特性無足夠差異的 , 分子量在 10107這樣一個寬范圍的大分子混合物 。 排阻色譜的應(yīng)用特點是： ① 適合與分離高分子組分 (FW 2022), 特別是非離子型化合物； ② 簡便快速分離那些分子量相差較大的簡單混合物； ③ 非常適合于未知樣品的初步探索分離 。
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