1120高效液相色譜c-資料下載頁(yè)
2025-08-16 00:56本頁(yè)面
【正文】 VM＋ VS 樣品分子 完全滲透 （ 自由擴(kuò)散 ） ； 182。 0 Kd 1, VM Ve VM＋ VS 樣品分子 選擇性滲透 , 樣品組分按它們的分子大小被分離 。 出峰順序?yàn)閺拇蟮叫?,均在溶劑峰之前流出柱子 。 思考： 1）排阻色譜的出峰順序？ 2）洗脫溶劑對(duì)分離是否有影響？ 在排阻色譜中 ， 選擇性僅與分子大小的差異有關(guān) 。要改進(jìn)分離度只能靠凝膠的孔徑大小和孔徑分布的最佳化來(lái)實(shí)現(xiàn) 。 由懸浮聚合產(chǎn)生的均勻球型微粒能提供高的柱效率 。與其它色譜的最大的區(qū)別為洗脫出的組分峰寬相等 。 排阻色譜 (SEC)— 色譜柱校正曲線 Eluent : THF （ 2） 分離模型 （ 自學(xué) ） ：所謂的分離機(jī)理就是根據(jù)一定的物理模型 , 用分子參數(shù)和柱結(jié)構(gòu)參數(shù)來(lái)計(jì)算 Ve和 K。 目前有三種分離理論： ① 平衡理論 ：認(rèn)定分子擴(kuò)散進(jìn)入填料顆粒的孔中并再出來(lái)所需的時(shí)間遠(yuǎn)小于溶質(zhì)區(qū)段在此停留的時(shí)間 , 溶質(zhì)分子出入孔達(dá)到了平衡 。 在其它形式的液相色譜中 ， 溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間進(jìn)行分配 。 不管是吸附或分配都涉及到兩相之間的移動(dòng) ， 伴隨著分子間和實(shí)際存在的熱焓變化 ， 而熵在這種色譜分離過(guò)程中的變化十分小 ， 常常忽略不計(jì) 。 由于 ΔH 一般為負(fù)值 ， 因此K值大于 1， 即溶劑峰先于溶質(zhì)峰流出 。 在體積排阻色譜中主要是熵的變化， ΔH≈0 ，所以 RSddKRSKln????? 排阻色譜運(yùn)行時(shí) ， 溶質(zhì)在填料微孔中的流動(dòng)有一定的限制 ， 因此 ， 溶質(zhì)的滲透伴隨著熵的降低 。由于溶質(zhì)峰是先于溶劑峰洗脫 ， Kd值自然小于 1，而且是一個(gè)不受溫度影響的參數(shù) 。 ΔS 對(duì)一切溶質(zhì)均為負(fù)值 ， 同時(shí)在分離過(guò)程中可以控制 。 ② 限制擴(kuò)散理論 ：認(rèn)為分離是由不同尺寸的聚合物分子在往孔中擴(kuò)散時(shí)其擴(kuò)散速度的不同決定的 。 ③ 流動(dòng)分離理論 ：速度的流型分布決定分離 。 （ 3）聚合物在體積排阻色譜上的分離 （自學(xué)） 體積排阻色譜洗脫的體積之差取決于已知溶質(zhì)分子量的校正曲線 ， 這一校正曲線可以近似地看成是一個(gè)直線方程： )VDe x p (DM E21 ??E21 VDDlnMln ??212E21E D)M/Ml n (VDMlnMlnV ???? 或221212s D4Mln)(D2)M/Ml n (R???????式中 ， D1表示校正曲線的截距 ， D2表示校正曲線的斜率 ，σ 表示標(biāo)準(zhǔn)偏差 。 12EMW V)N/V(M4Rlg ??式中 ， M代表計(jì)算曲線的斜率 ， VE為組分的洗脫體積 ， VI是孔體積 ， N是理論塔板數(shù) 。 這一方程可以比較理想地用來(lái)描述排阻色譜的分離度 。 實(shí)驗(yàn)得出均數(shù)分子量和重均分子量分別為： ??????EVE21EWE21EEn)VDe x p (DFVM)]VDe x p (D/FV[V1M實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)公式中 MW12 RMM ? ， 定義為最小分離分子量之比，是排阻 色譜中非常重要的參數(shù)。一般情況下 分子量測(cè)量實(shí)驗(yàn)曲線 2．凝膠填料的選擇與匹配 凝膠是排阻色譜的核心 , 是產(chǎn)生分離的基礎(chǔ) , 進(jìn)行排阻色譜實(shí)驗(yàn)的重要一環(huán)是選擇和搭配具有不同孔徑及色譜性能良好的凝膠 。 （ 1） 凝膠的分類 ① 有機(jī)凝膠：交聯(lián)聚苯乙烯 、 交聯(lián)聚乙酸乙烯酯 、交聯(lián)葡聚糖等 。 其特點(diǎn)是熱穩(wěn)定性 、 機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)惰性差 , 凝膠易老化 , 所以對(duì)使用條件要求較嚴(yán)格 。 ② 無(wú)機(jī)凝膠：多孔硅膠和多孔玻璃 。 （ 2） 凝膠的選擇 根據(jù)凝膠的色譜指標(biāo) , 即 滲透極限 和 分離范圍 進(jìn)行選擇 。 實(shí)際使用時(shí) , 可采用搭配柱子的方法 , 將不同規(guī)格的凝膠柱串聯(lián)起來(lái) , 使分子量 淋出體積曲線的線性分布與待測(cè)樣品的分子量相當(dāng) , 根據(jù)樣品的不同和要求不同 , 決定采用那種凝膠和用幾根柱 。 國(guó)產(chǎn)交聯(lián)聚苯乙烯凝膠特性見(jiàn)下表： 凝膠型號(hào) 滲透極限 分離范圍 NGX1 5E3 1E2~5E3 NGX2 2E2~ NGX3 4E4 5E2~4E4 NGX4 7E3~ NGX5 1E4~ NGX6 5E4~ NGX7 3E6 1E5~3E6 （ 3） 流動(dòng)相 在凝膠色譜實(shí)驗(yàn)中 , 溶劑的作用原則上沒(méi)有其他液相色譜重要 。 試樣的分離并不依賴于溶劑與試樣間的相互作用力 。 溶劑的選擇主要是從對(duì)樣品的溶解能力 , 溶劑與儀器的匹配以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理的方便來(lái)考慮的 。 3．應(yīng)用 排阻色譜是一種 廣譜的分離方法 , 可用于分離那些因溶解度 、 極性吸附或離子特性無(wú)足夠差異的 , 分子量在 10107這樣一個(gè)寬范圍的大分子混合物 。 排阻色譜的應(yīng)用特點(diǎn)是： ① 適合與分離高分子組分 (FW 2022), 特別是非離子型化合物； ② 簡(jiǎn)便快速分離那些分子量相差較大的簡(jiǎn)單混合物； ③ 非常適合于未知樣品的初步探索分離 。
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