1120高效液相色譜c(已改無錯(cuò)字)
2022-09-13 00:56:54 本頁面
【正文】 探針檢測無紫外響應(yīng)物質(zhì)的技術(shù) 。 在離子色譜中 ， 如果流動(dòng)相含有吸收紫外光性能的洗脫離子 ， 那么可以采用紫外檢測器間接檢測無紫外吸收的樣品離子 。 四、間接光度色譜法 (Indirect photometric chromatography) 方法原理： 在陰離子分離中 ， 假設(shè)以具有吸收紫外光性能的洗脫掖 Na+E溶液來洗脫無吸收的樣品液Na+S ， 可以通過檢測 E的變化來間接測定 S。 因?yàn)榛诮粨Q平衡原理和電中性原理 ， 在流出液中 ， 當(dāng)S離子出現(xiàn)時(shí) ， 洗脫劑中的 E離子必然有一協(xié)調(diào)的 、等當(dāng)量的改變 （ Na+的濃度確定 ， S增大 ， E則減少 ） ， 這樣連續(xù)監(jiān)測洗脫離子 E的濃度變化 ， 從而反應(yīng)出 S離子在柱中被分離的情況 。 間接光度法出現(xiàn)負(fù)峰色譜圖，可將信號(hào)轉(zhuǎn)化為“正峰”處理。 可見在間接光度色譜法中 ， 洗脫劑的吸收光離子具有雙重作用： l 從色譜分離柱中選擇性地洗脫樣品離子 l 在流出液中充當(dāng)樣品離子的探針 此外 ， 對于無吸收的樣品離子間接光度法的色譜峰面積只與樣品離子的濃度有關(guān) ， 而與樣品的種類無關(guān) ，同時(shí)靈敏度隨所用洗脫劑的濃度的降低而增大 。 除了傳統(tǒng)的以抑制柱為特點(diǎn)的離子交換色譜 （ HPIC）外 ， 離子色譜技術(shù)還出現(xiàn)了 以 Donnan排斥 、 空間排阻和吸附過程為分離機(jī)理的離子排斥色譜 （ HPIEC） 和以吸附為分離機(jī)理的離子對色譜 （ MPIC） 。 五、離子排斥色譜 (Ion Exclusion Chromatography， IEC) 高容量陽離子交換樹脂使樣品 陰離子由于受到Donnan排斥很快流出色譜柱 , 而低電離度 弱酸分子能進(jìn)入到樹脂內(nèi)部 ， 且通過溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)之間的極性相互作用和溶質(zhì)與樹脂基體間的非極性相互作用為固定相保留 。 因此 ， 在離子排斥色譜中溶質(zhì)的保留作用取決于： l 溶質(zhì)受阻程度的不同 l 溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)間極性相互作用的差別 l 溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)間非極性相互作用的差別 離子排斥色譜主要用于有機(jī)酸無機(jī)弱酸和醇類的分離 。 如用離子排斥色譜柱 , 稀鹽酸為流動(dòng)相 , 可分析 30余種常見的水可溶性有機(jī)酸 , 其中包括用氣相色譜難于分析的羥基有機(jī)酸 。 強(qiáng)酸中弱有機(jī)酸的測定 ， 用陰離子交換分離是非常困難的 。 例如 （ 為什么 ？ ） 。 但用 IEC，硫酸根不被保留，不干擾弱酸（檸檬酸、羥基丁二酸、乙醇酸、乙酸、丁二酸）的定量。 體積排阻色譜 (Size Exclusion Chromatography, SEC) 體積 排阻色譜 , 也稱為 凝膠色譜 , 包括 : 182。 凝膠過濾色譜 (GFC):,以水為流動(dòng)相 182。 凝膠滲透色譜 (GPC): 以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相 。 在許多色譜模式探索中 ,人們往往從溶質(zhì) ——固定相 ——流動(dòng)相之間的相互作用力來討論色譜分離問題 。 流動(dòng)相溶劑的選擇非常重要 。 對于排阻色譜 ， 這一思路是否可行 ？ 排阻色譜分離機(jī)理 :(注意與其它液相色譜的不同點(diǎn) ） 一般 液相色譜 是根據(jù)樣品組分在固定相和流動(dòng)相之間的平衡分配系數(shù)不同 ， 造成不同的移動(dòng)速度而達(dá)到分離 。 而 排阻色譜 是根據(jù)溶質(zhì)分子尺寸 (分子量 、 有效體積 、 流體力學(xué)體積 )的差別進(jìn)行分離的 。 它主要應(yīng)用于高分子化合物和聚合物的分子量分布測定 , 在生物化學(xué)和材料科學(xué)領(lǐng)域中得到廣泛的應(yīng)用 。 1．排阻色譜分離過程 排阻色譜的分離過程是在裝有多孔物質(zhì) (交聯(lián)聚苯乙烯 、 多孔玻璃 、 多孔硅膠等 )為填料的柱中進(jìn)行的 , 填料的孔徑在制備時(shí)已嚴(yán)格加以控制 。 . 溶質(zhì)在填料中的滲透體積 不同樣品分子通過多孔填料的排阻機(jī)理示意圖 如果某樣品分子太大不能進(jìn)入填料的孔中 , 就會(huì)被填料所排阻 。 這些 大的樣品分子 直接流過柱子 , 并 首先 在色譜圖上出現(xiàn) 。 一些 小 到幾乎可滲透到整個(gè)填料顆粒的 樣品分子 具有最大保留值 , 通過柱子最慢 , 并最后 在色譜圖上出現(xiàn) 。 而中等體積的樣品分子靠近孔壁的可能較小 , 平均來說 , 這些分子在孔中停留的時(shí)間較短 , 它們通過柱子的速度取決于它們的相對大小 。 色譜柱體積： Vc = VM + VS + V 式中 V為填料體積 ， VS為填料微孔隙總體積 ,VM為柱空隙體積 （ 顆粒間隙體積 ） 。 組分的洗脫體積： Ve = VM＋ KdVS 式中 Kd為排阻色譜的分配系數(shù) , 它表示組分分子可以擴(kuò)散進(jìn)入的內(nèi)孔體積 (即對某種尺寸的溶質(zhì)分子來說可以滲透進(jìn)去的那部分孔體積 )與內(nèi)孔總體積之比 。 排阻色譜中樣品分子的大小是指它在流動(dòng)相中的有效體積 , 即它在流動(dòng)相中的轉(zhuǎn)動(dòng)半徑 , 這與分子的幾何形態(tài) (球形 、 棒形或無規(guī)則卷曲形 )和溶劑化作用有關(guān) 。 182。 Kd = 0, Ve = VM 樣品分子被 完全排阻 ； 182。 Kd = 1, Ve =
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