chapter親和層析ppt課件-資料下載頁
2025-01-06 13:27本頁面
【正文】 主要用于各種酶、輔酶、激素和免疫球蛋白等生物分子的分離分析。 1）純化大分子物質(zhì) 如：純化糖蛋白用凝集素（能可逆性地結(jié)合碳水化合物的蛋白質(zhì)）， LectinSepharose 4B 2) 研究酶的結(jié)構(gòu)與功能： 分離有生物活性與失去生物活性的蛋白質(zhì)。 應(yīng)用 tPA的純化 — 酶的抑制劑為親和配基 組織纖維溶酶原激活物 親和色譜的應(yīng)用 干擾素的純化 — 免疫親和色譜 親和色譜的應(yīng)用 脫氫酶的純化 — 色素親和色譜 親和色譜的應(yīng)用 淀粉酶抑制劑的純化 — 固定化金屬離子親和色譜 親和色譜的應(yīng)用 基因重組融合蛋白的純化 親和色譜的應(yīng)用 基因重組融合蛋白的純化 利用融合蛋白生產(chǎn)目標產(chǎn)物使分離純化過程更簡便。 但利用融合蛋白表達目標產(chǎn)物也帶來新問題： 親和標記物除少數(shù)用化學水解法外， 多數(shù)用蛋白酶水解法裂解除去 ，酶裂解法雖然選擇性較高，但需要在較 高溫度 下進行，容易引起目標蛋白的 非特異性水解 ； 親和色譜的應(yīng)用 裂解后需附加色譜分離步驟 除去蛋白酶 ，使純化過程復雜化； 考慮蛋白酶需在裂解完成后除去，為方便純化操作，一般蛋白酶用量較小，易裂解不完全； 基因重組融合蛋白的純化 由于大分子蛋白酶不能有效地與融合蛋白部位接觸，許多融合蛋白很難在所希望的融合部位裂解。 開發(fā)了利用融合蛋白酶裂解目標融合蛋白的方法，解決了裂解用酶的分離問題。 利用分子質(zhì)量?。?2*104）、低溫下活性高、水解特異性高的 蛋白酶 3C與不同親和標識物融合，得到各種標識物的融合蛋白酶 3C（記作 Tag3C），可有效裂解其他融合蛋白的融合部位，同時容易用相應(yīng)親和吸附色譜回收。 親和色譜的應(yīng)用 原理和特點 親和膜（ affinity membrane) 利用親和配基修飾的微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標蛋白質(zhì)，是固定床親和色譜的變型。所以，利用親和膜的純化方法又稱親和膜色譜。 親和膜色譜 傳統(tǒng)固定床型親和色譜，床層壓降隨流速線性增大； 軟凝膠類固定粒子機械強度較低，易壓密變形，流速下降； 高壓操作增大設(shè)備投資。 解決辦法：色譜柱徑向放大 親和膜色譜 親和膜色譜的優(yōu)點： 無內(nèi)擴散傳質(zhì)阻力，僅存在表面液膜傳質(zhì)阻力，由于傳質(zhì)阻力小，吸附速度快，達到吸附平衡所需時間短，配基利用率高； 設(shè)備壓降小，流速快，設(shè)備體積小，配基用量低； 微孔膜介質(zhì)種類多，價格便宜 缺點： 膜厚度（柱高）很?。ㄒ话?10100微米），理論板數(shù)低，吸附和清洗效率低 親和膜色譜 親和錯流過濾 親和雙水相分配 親和反膠團萃取 親和沉淀 其他親和分離技術(shù)
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1