離子交換層析ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-12 12:40本頁(yè)面
【正文】 氨酸從樹(shù)脂中洗脫出來(lái)。 ? 氨基酸可與茚三酮反應(yīng)生成有色化合物。因此可將收集到的水溶液與茚三酮試劑反應(yīng)，觀(guān)察其是否生成藍(lán)紫色化合物而判斷洗脫情況，并可通過(guò)比色定量 . ? (二 )試劑 ? Dowex 50 型 ? Dowex 50 為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 . 顆粒直徑 297μm，以帶負(fù)電荷的 磺酸基 團(tuán)（ — SO3H）為功能基團(tuán)，它的解離不受外界溶液 pH 的影響?；撬峄鶊F(tuán)能夠與帶正電荷的陽(yáng)離子發(fā)生可逆的離子交換反應(yīng)。 ? ? （ 1） pH 檸檬酸鈉緩沖液 ? 天冬氨酸 pI ＜ pH 檸檬酸鈉緩沖液帶負(fù)電荷。 ? 賴(lài)氨酸 pI ＞ pH 檸檬酸鈉緩沖液帶正電荷 。 ? (2) mol/L NaOH ? 改變洗脫體系的 pH值 ， 使本與樹(shù)脂結(jié)合的賴(lài)氨 ? 酸帶上負(fù)電荷 ， 從而被洗脫下來(lái) 。 ? ? 稱(chēng)取天冬氨酸 、 賴(lài)氨酸各 10 mg 溶于 10 ml ? 檸檬酸鈉緩沖液中 。 ? ? 氨基酚與茚三酮反應(yīng)顯色以檢測(cè)氨基酸洗脫情況。 ? (三 )操作 ? ：將 Dowex50裝柱后，用 脂 5分鐘。再用 平衡 10分鐘。（方法同凝膠層析法）加樣 8滴。當(dāng)樣品進(jìn)入樹(shù)脂后，加入，每管收集3ml（控制流速 15滴 /分鐘）。當(dāng)?shù)谝环逡怀霈F(xiàn)，換用，直至第二峰收集完畢。用 10分鐘，再生。 檢測(cè)：從第 2管起每收集管中加入 ml茚三酮顯色液 ，充分混合 ， 沸水浴 10～ 15分鐘 ， 自來(lái)水冷卻 ， 觀(guān)察氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng) ， 若生成紫色化合物 ， 則說(shuō)明收集到氨基酸 。
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