cell培養(yǎng)用液ppt課件-資料下載頁
2025-01-06 13:27本頁面
【正文】 基礎(chǔ)培養(yǎng)基、若干微量元素和乙醇胺等 ,故成本較低。由于它不含任何蛋白成分 ,故大大簡化了下游工作的流程和工藝 ,且容易獲得高純度的生物產(chǎn)品。目前已經(jīng)生產(chǎn)出適合于 CHO細胞 (中國倉鼠卵巢細胞株 )生長的 PFM；在無血清無蛋白培養(yǎng)基中培養(yǎng) Vero細胞的研究是一個熱點。 (chemical defined medium， CDM） 限定化學(xué)成分培養(yǎng)基（ CDM）是指培養(yǎng)基中的所有成分都是明確的，不含動物蛋白，使用一些已知結(jié)構(gòu)和功能的小分子化合物，這更有利于分析細胞的分泌產(chǎn)物。目前已經(jīng)有適合于２９３細胞 (人腎上皮細胞系 )，ＣＨＯ細胞，雜交瘤細胞生長的ＣＤＭ問世。 胰蛋白酶（ trypsin）溶液 原理：細胞間蛋白質(zhì)水解，使細胞解離 活性用消化酪蛋白的能力表示： 1： 125或 1： 250，即一份胰酶可消化１２５或２５０份的酪蛋白 配置濃度： %～ %，作用 515分鐘； 最適 PH值是 8～ 9； 注意 :用無鈣鎂溶液配置，如ＰＢＳ和Ｄ－Ｈ ank’ s液 ,血清和鈣鎂離子均可抑制其活性 . 過濾除菌 小包裝分裝，儲存于－２０ ℃ 如何中止胰酶消化？ 三、雜用液 ? EDTA溶液：可鏊和細胞間的鈣鎂離子，破壞細胞間連接，使細胞分離 使用濃度 :%，配制時加堿助溶 可高壓滅菌，也可過濾除菌 對于帖壁特別牢的細胞，可用ＥＤＴＡ和胰酶混合液進行消化 不會被血清中和， 不易除去 ，通常不使用 膠原酶（ collagenase）溶液 ?作用對象 : 膠原，對細胞溫和，損傷較小 ?經(jīng)常用于 上皮類細胞的原代培養(yǎng) ?使用濃度 :～ ／Ｌ ?PH值 ?不受血清和鈣鎂離子抑制，可用Ｈａｎｋ‘ｓ和ＰＢＳ配制 為什么胰蛋白酶和膠原酶不能混合消化細胞？ 1） 碳酸氫鈉溶液 若是密閉式培養(yǎng)，則不必按說明書要求加入碳酸氫鈉，而是用碳酸氫鈉調(diào)整培養(yǎng)基ＰＨ值． 若是開放式培養(yǎng)，通常先加入適量的碳酸氫鈉２．２ｇ／Ｌ，邊加邊攪拌，用 １ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ和ＨＣｌ 調(diào)整ＰＨ，過濾除菌使用． ＰＨ調(diào)整液必須用三蒸水配制！ ?HEPES液是一種弱酸 ,能防止培養(yǎng)基 PH值迅速變動 ,可維持 PH值在 。 ?呈橘紅色，細胞生長過程變化不大 。 ?在進行克隆化培養(yǎng)時由于長期不更換培養(yǎng)基，要加入ＨＥＰＥＳ 。 ?在開放式培養(yǎng)，觀察細胞時，培養(yǎng)基脫離了５％的ＣＯ ２ 環(huán)境，ＣＯ ２ 迅速逸出而使培養(yǎng)基ＰＨ升高，若加ＨＥＰＥＳ則能維持在ＰＨ７．０ . 2)HEPES液 : ?在細胞代謝中起重要作用 ,在溶液中很不穩(wěn)定，易降解，在使用前添加。 ?一般 4℃ 放置兩周后大部分降解，１ｍｌ分裝并保存于－２０ ℃ ?谷氨酰胺補充溶液使用濃度 :。 ?配制成 100倍濃縮液，每１００ｍｌ培養(yǎng)基加入１ｍｌ，加溫至 30℃ 完全溶解后，過濾除菌使用。 3)谷氨酰胺 glutamine補充溶液 常用為青鏈霉素雙抗溶液，可預(yù)防大多數(shù)細菌的污染． ? 青霉素使用終濃度 :100000U/L； ? 鏈霉素使用終濃度 :； ? 配制方法 :100倍濃縮液 ,可用培養(yǎng)液或 PBS配制。 4)抗生素：
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