薄層層析柱層析ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 05:18本頁面
【正文】 劑前沿上升到一定高度時取出，盡快在板上標(biāo)上展開劑前沿位置。吹干，觀察斑點(diǎn)位置，計算Rf值。 四、實驗關(guān)鍵及注意事項： ? 薄層層析時，薄層板的制備要厚薄均勻，表面平整光潔。 ? 點(diǎn)樣時，各樣點(diǎn)間距 1— ，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過 2mm，不能太靠邊。 ? 柱層析時，柱子要致密緊實，無氣泡。洗柱、分離時洗脫劑液面不能低于柱中填充物上面。 吸附劑的吸附力強(qiáng)弱，是由能否有效地接受或供給電子，或提供和接受活潑氫來決定。被吸附物的化學(xué)結(jié)構(gòu)如與吸附劑有相似的電子特性，吸附就更牢固。 常用吸附劑的吸附力的強(qiáng)弱順序為：活性炭、氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣、石膏、纖維素、淀粉和糖等。以活性炭的吸附力最強(qiáng)。 吸附劑在使用前須先用 加熱脫水 等方法活化。大多數(shù)吸附劑遇水即鈍化，因此吸附層析大多用于能溶于有機(jī)溶劑的有機(jī)化合物的分離，較少用于無機(jī)化合物。 洗脫溶劑的解析能力的強(qiáng)弱順序是：醋酸、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四氯化碳和己烷等。為了能得到較好的分離效果，常用兩種或數(shù)種不同強(qiáng)度的溶劑按一定比例混合，得到合適洗脫能力的溶劑系統(tǒng)，以獲得最佳分離效果。 ?吸附層析 在 支持物上形成部分互溶的兩相系統(tǒng) 。一般是水相和有機(jī)溶劑相。常用支持物是硅膠、纖維素和淀粉等，這些親水物質(zhì)能儲留相當(dāng)量的水。被分離物質(zhì)在兩相中都能溶解，但分配比率不同，展層時就會形成以不同速度向前移動的區(qū)帶。 ?分配層析 ?離子交換層析 支持物是人工交聯(lián)的帶有 能解離基團(tuán)的有機(jī)高分子 ，如離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠等。 帶陽離子基團(tuán)的，如磺酸基（ — SO3H）、羧甲基（ — CH2COOH）和磷酸基等為陽離子交換劑。帶陰離子基團(tuán)的，如 DEAE— （二乙基胺乙基）和QAE— （四級胺乙基）等為陰離子交換劑。 離子交換層析只適用于 能在水中解離 的化合物，包括有機(jī)物和無機(jī)物。對于蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸及核苷酸的分離分析有極好的分辨力。離子交換基團(tuán)在水溶液中解離后，能吸引水中被分離物的離子，各種物質(zhì)在離子交換劑上的離子濃度與周圍溶液的離子濃度保持平衡狀態(tài)，各種離子有不同的交換常數(shù)， K值愈高，被吸附愈牢。洗脫時，增加溶液的離子強(qiáng)度，如改變 pH，增加鹽濃度，離子被取代而解吸下來。洗脫過程中，按 K值不同，分成不同的區(qū)帶。 支持物是人工合成的交聯(lián)高聚物，在水中膨脹后成為凝膠。凝膠內(nèi)為內(nèi)水層，凝膠周圍的水為外水層。控制交聯(lián)度以形成不同孔徑的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。凝膠只允許被分離物質(zhì)中小于孔徑的分子進(jìn)入，大于孔徑的分子被排斥在外水層，最先被洗脫下來。而進(jìn)入孔徑的分子也按分子量大小大致分離成不同的區(qū)帶。選擇不同規(guī)格的凝膠，可把一個混合物按分子量的差異分成不同的組分。這種方法曾被稱為分子篩。目前常用的凝膠商品有：葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠和聚苯乙烯凝膠等。 ?凝膠過濾層析
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