層析分離技術與設備-資料下載頁
2025-08-01 17:43本頁面
【正文】 M）溶液洗滌處理，以除去其表面可能吸附的雜質。然后用去離子水（或蒸餾水）洗滌干凈并真空抽氣（吸附劑等與溶液混合在一起），以除去其內部的氣泡。 （ 4）裝柱操作 ?關閉層析柱出水口，并裝入 1/3柱高的緩沖液，并將處理好的吸附劑等緩慢地倒入柱中，使其沉降約3cm高。 ?打開出水口，控制適當流速，使吸附劑等均勻沉降，并不斷加入吸附劑溶液。注意不能干柱、分層，否則必須重新裝柱。 ?最后使柱中基質表面平坦并在表面上留有 2~3cm高的緩沖液，同時關閉出水口。 ?大型柱通常配備自動裝柱卸柱裝置。 平衡 （ 1）作用 ?使層析介質適應操作條件。 （ 2）平衡操作 ?柱子裝好后，用恒流泵在恒定壓力下以平衡緩沖液（有一定的 pH和離子強度）走柱子，平衡與洗脫時的壓力盡可能保持相同。 （ 3）平衡液體積 ?一般為 3~5倍柱床體積，以保證平衡后柱床體積穩(wěn)定及基質充分平衡。 原料處理及進料 （ 1）原料處理 ?原料液須澄清，調節(jié)粘稠度、濃度、離子強度等。 ?澄清方法：微濾（ 1um以下）、離心（ 10000g） ?大規(guī)模生中有管路系統(tǒng)完成。 （ 2）進料（上樣） ?加樣量：一般，加樣量盡量少些，分離效果比較好。通常加樣量應少于 20%的操作容量，體積應低于 5%的床體積。 ?進料量由流量計和閥門控制。 ?大規(guī)模生中通過轉換平衡緩沖液閥門與進料閥門進料。 洗脫 ?洗脫的方式可分為簡單洗脫、分步洗脫和梯度洗脫三種。 （ 1）簡單洗脫 ?概念：柱子始終用同樣的一種溶劑洗脫，直到層析分離過程結束為止。 ?適用：被分離物質對固定相的親合力差異不大，其區(qū)帶的洗脫時間間隔（或洗脫體積間隔）也不長。 （ 2）分步洗脫 ?按照洗脫能力遞增的順序排列幾種洗脫液，進行逐級洗脫。 ?每次用一種洗脫液將其中一種組分快速洗脫下來。 ?適用：混合物組成簡單、各組分性質差異較大或需快速分離的場合。 （ 3）梯度洗脫 ?洗脫液的洗脫能力逐步連續(xù)增加。梯度可以指濃度、極性、離子強度或 pH值等。最常用的是濃度梯度。 ?適用：混合物中組分復雜且性質差異較小。 （ 4）洗脫流速 ?速度太快，各組分在固液兩相中平衡時間短，相互分不開，仍以混合組分流出。速度太慢，將增大物質的擴散，同樣達不到理想的分離效果。 清洗和再生 ?清洗的作用：洗去牢固附著在層析介質上的物質。 ?清洗方法：以清洗溶液大流量過柱。 ?清洗溶液：根據分離物質選擇 ?蛋白質類：水、 NaCl溶液、 NaOH溶液等 ?脂類：非離子去污劑溶液、乙醇等 ?核酸類： NaOH溶液、高鹽溶液等 ?內毒素及病毒： NaOH溶液、乙醇等 消毒、滅菌和保存 （ 1）消毒和滅菌 ?方法：高壓蒸汽滅菌（未裝柱）、采用消毒試劑（裝柱后） （ 2）保存 ?裝柱后必須濕態(tài)保存：常用乙醇、低鹽緩沖液等。
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