重組dna技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-05 06:36本頁(yè)面
【正文】 ation） ： 是指將重組質(zhì)粒 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。轉(zhuǎn)染（ transfection） ： 將重組噬菌體 DNA直接引入受體細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction） ： 重組噬菌體 DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為載體，將重組 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)的過程，也稱為感染（ infection）。 41 重組體的篩選與鑒定 篩選是指通過某些特定方法，從被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞群體或基因文庫(kù)中，鑒別出真正的陽性重組子的過程。 42 （一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法 （ 1）抗生素抗性篩選 （ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選（二） 根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法方法：43（ 1）抗生素抗性篩選 : 大多數(shù)載體均帶有抗生素抗性基因（一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法 :外源基因插入到一個(gè)抗性基因位點(diǎn)，使 此種抗生素抗性消失，重組體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌不能在含有 這種抗生素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。，保留了抗性基因活性，所轉(zhuǎn)化的細(xì)胞 就能在含此種抗生素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng) ,未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞 則不能生長(zhǎng)。44(插入失活法)抗生素抗性篩選45（ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選4647（二）根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法 （ 1）快速裂解菌落并鑒定分子大小（ 2）內(nèi)切酶酶切圖譜鑒定（ 3）分子雜交（ 4） PCR（ 5）核酸序列測(cè)定48原位雜交49外源基因的表達(dá)與分離純化（一） 原核表達(dá)體系 （ ） 利用 原核細(xì)胞 （大腸桿菌為主）作受體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)外源目的基因。 50（二）真核表達(dá)體系（ 酵母、昆蟲、哺乳類動(dòng)物細(xì)胞） 利用 真核細(xì)胞 作為受體細(xì)胞，誘導(dǎo)表達(dá)外源基因51（ 1） 分 離 ：提取和 獲得目的基因 和載體（ 2） 切 割 ：分別對(duì) 目的基因 和載體 DNA 酶切；（ 3） 連 接 ： 目的基因與載體連接，形成 新的重組 DNA分子；（ 4） 轉(zhuǎn) 化 ： 用重組 DNA分子轉(zhuǎn)化受體細(xì) 胞 ；（ 5） 篩 選 ： 篩選 轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞克?。?6） 表 達(dá)： 培養(yǎng)獲得外源基因的細(xì)胞或 生物體，獲得所需的遺傳性 狀或表達(dá)出所需要的產(chǎn)物。小結(jié)：52第六節(jié) 重組 DNA技術(shù)的在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （自學(xué)）53謝 謝！
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