重組dna技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-08 06:36本頁(yè)面
【正文】 小結(jié)：52第六節(jié) 重組 DNA技術(shù)的在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （自學(xué)）53謝 謝！。44(插入失活法)抗生素抗性篩選45（ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選4647（二）根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法 （ 1）快速裂解菌落并鑒定分子大?。?2）內(nèi)切酶酶切圖譜鑒定（ 3）分子雜交（ 4） PCR（ 5）核酸序列測(cè)定48原位雜交49外源基因的表達(dá)與分離純化（一） 原核表達(dá)體系 （ ） 利用 原核細(xì)胞 （大腸桿菌為主）作受體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)外源目的基因。 42 （一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法 （ 1）抗生素抗性篩選 （ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選（二） 根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法方法：43（ 1）抗生素抗性篩選 : 大多數(shù)載體均帶有抗生素抗性基因（一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法 :外源基因插入到一個(gè)抗性基因位點(diǎn)，使 此種抗生素抗性消失，重組體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌不能在含有 這種抗生素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction） ： 重組噬菌體 DNA分子，在體外經(jīng)過(guò)包裝成具有感染能力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為載體，將重組 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程，也稱為感染（ infection）。轉(zhuǎn)化（ transformation） ： 是指將重組質(zhì)粒 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。3180。 （ 2）平端連接 ：37（ 3）定向連接：Eco RⅠ 切割位點(diǎn) Bg lⅡ 切割位點(diǎn)+EcoRⅠ + Bg lⅡ雙酶切 Eco RⅠ + Bg lⅡ雙酶切T4 DNA連接酶重組體38（ 4）同聚物加尾連接：39（ 5）人工接頭連接： 接頭 是指含有某些限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)的寡核苷酸片段。目的基因與載體的連接⑴ 粘性末端連接：36 平端 DNA片段可以在 T4 DNA連接酶的作用下相連接，但連接效率較低。35 由同一種限制酶切割或不同的限制酶切割形成 互補(bǔ)的黏性末端 。(4)聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR） 已知目的基因的基因序列，用 PCR從基因組DNA中獲得目的基因，或用逆轉(zhuǎn)錄 PCR方法直接從mRNA獲得特定基因的 cDNA。 理論上講，這些重組載體上帶有了該生物體的全部基因，稱為 基因文庫(kù) 。 目前使用 DNA合成儀合成的片段長(zhǎng)度有限，一般
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