重組dna技術(shù)1(參考版)
2024-11-21 23:21本頁面
【正文】 2． 進(jìn)入宿主細(xì)菌細(xì)胞后 ， pUC18在每個細(xì)胞中可 復(fù)制形成大約 500個拷貝 。用 Southern雜交對轉(zhuǎn)基因生物外源目的基因進(jìn)行檢測分析。還可以利用 DNA雜交技術(shù)直接鑒定帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌克隆。 凝膠電泳是用于分離、純化和鑒定 DNA片段最常規(guī)的實驗技術(shù)。用紫外分光光度計測定 DNA溶液的純度和濃度。 ? 未來：健康領(lǐng)域、基礎(chǔ)科學(xué)研究領(lǐng)域 …… ? 2020年 2月 12日美、英、日、法、德、中六國科學(xué)家，以及 Celera 公司聯(lián)合公布人類基因組圖譜，及初步分析結(jié)果 ? NATURE | VOL 409 | 15 FEBRUARY 2020 | ? SCIENCE| |16 FEBRUARY ? 2020 | 重組 DNA技術(shù)的一般操作步驟有： (1)獲得目的基因； (2)構(gòu)建重組質(zhì)粒； (3)轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞； (4)篩選和鑒定轉(zhuǎn)化子； (5)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞獲得所需性狀或所需產(chǎn)物。 ? 2020年 6月 26日，人類基因組工作框架圖完成，標(biāo)志著功能基因組時代的到來。 ? 1997年，大腸桿菌基因組序列測定宣告完成。 ? 1995年，科學(xué)家們獲得了人類第 第 16和第 22號染色體的高密度物理圖。 研究目標(biāo) 擬在 15年內(nèi)至少投入 30億美元，完成對人基因組 30億個堿基對的順序分析，完成對人基因組中全部堿基定位，并開展模式生物基因組研究。 ? 一般克隆基因的檢查和鑒定方法 ? 瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定大小不等的酶解片段： 磷酸基團帶負(fù)電荷 酶解片段 向陽極移動 電場驅(qū)動力和凝膠阻力 ——不同遷移率 分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物 ? 酶切和電泳方法 Restriction mapping 酶切 克隆基因的檢查和鑒定方法 ? 32P標(biāo)記的 DNA分子探針 ? 雜交 ? 放射自顯影法 ? DNA雜交直接鑒定 ? 植物遺傳轉(zhuǎn)化常用的方法 ? 載體法轉(zhuǎn)化 —— 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法 （ Ti質(zhì)粒 ） ? 基因的直接轉(zhuǎn)移 （ 1） 高壓電脈沖電激穿孔 （ 2） 基因槍法 （ 3） 微注射法 ? 構(gòu)建缺失 chlL基因的藍(lán)細(xì)菌突變株 （ 直接轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒 ） ? 紀(jì)念發(fā)明者 Edward Southern （ 1） 提取總 DNA （ 2） 酶解 （ 3） 電泳 （ 4） 轉(zhuǎn)移到濾膜 （ 5） 變性解鏈 （ 6） DNA探針及雜交 （ 7） 洗脫 （ 8） 放射自顯影 （ 9） 比較分析 轉(zhuǎn)化子的分析 —— Southern雜交 鑒定克隆 Southern分子雜交 ? Southern雜交分析示例 A. DNA體外重組實驗 B. 抗生素篩選轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 C. 培養(yǎng)突變株細(xì)胞 D. Southern雜交實驗結(jié)果顯示 ， 外源目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入突變株細(xì)胞中 ? 1973年 ， 由美
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