重組dna技術(shù)1-文庫吧在線文庫
【正文】 v m 0 m,v % m,y % V, w % W,y % ? 人類基因組計(jì)劃主要應(yīng)用了 4方面相互配合與補(bǔ)充的研究方法和技術(shù)： 1. 用 RFLP等標(biāo)記出包含大約1 Mb的超大片段進(jìn)行定位作圖 2. 用 RFLP把超大片段分割成10多個(gè)包含 100 kb的大片段 ，做出它們的物理圖 3. 用酵母人工染色體 (YACs）或其他載體構(gòu)建包含其中小片段的一系列重疊的克隆 ，約 ～ Mb 4. 對(duì)小片段逐個(gè)進(jìn)行測序 ，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)染色體的測序和作圖 ? 1992年，酵母 3號(hào)染色體 DNA的全部 315 357個(gè)堿基序列的測定，這是人類完成的第一條真核生物染色體 DNA的全序列。 獲得目的基因的方法有：提取總 DNA構(gòu)建基因文庫并從中調(diào)用；以 mRNA為模板合成互補(bǔ) DNA片段；利用 PCR特異性擴(kuò)增所需目的基因片段等。 本章摘要 1． 該質(zhì)粒 比較小 ， 可以插入一段較長的 DNA片段 ?？梢罁?jù) DNA分子的大小來使其分離。 ? 1999年 12月 1日，科學(xué)家們宣布，人類第 22號(hào)染色體，含 107個(gè)堿基序列的測定已經(jīng)全部完成，這是人類完成的第一條人類自身染色體的全序列測定。 在多克隆位點(diǎn)插入外源目的基因，破壞了 lacZ基因的結(jié)構(gòu)，大腸桿菌形成 白色的克隆 利用 lacZ基因的插入失活 篩選重組質(zhì)粒 篩選克隆 pUC18載體還攜帶了 抗生素 （ antibiotic） 基因 ， 可 篩選重組質(zhì)粒 。 進(jìn)入到宿主細(xì)胞中的一個(gè)質(zhì)?？梢源罅吭黾悠淇截悢?shù) 。 ? 基因組 DNA文庫的構(gòu)建 將總 DNA經(jīng)過酶解 ， 經(jīng)蔗糖梯度離心或瓊脂糖凝膠電泳分離不同長短的 DNA片段 。11 重組 DNA技術(shù) 重組 DNA技術(shù)是基因工程的核心技術(shù) 獲得需要的目的基因 （ 外源基因 ） 構(gòu)建重組質(zhì)粒和基因克隆 轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞和轉(zhuǎn)化子的篩選 轉(zhuǎn)化子的分析 —— Southern雜交 重組 DNA技術(shù) ， 又稱為 基因克隆 或 分子克隆技術(shù) ， ? 克隆 (clone)無性繁殖 ? 分子克隆 – DNA的無性繁殖技術(shù) ? 重組 DNA技術(shù) 包括了一系列的分子生物學(xué)操作步驟 。 包含的基因組片段分別克隆在質(zhì)?；蚴删w載體上 ， 轉(zhuǎn)染細(xì)菌或體外包裝到噬菌體顆粒上便構(gòu)成了該生物的基因組文庫 。 質(zhì)粒 質(zhì)粒載體 的一般結(jié)構(gòu) DNA克隆常用載體 ? 基因克隆獲得大量目的基因后 ， 就要使其在合適的宿主細(xì)胞 中表達(dá) ， 產(chǎn)生需要的基因表達(dá)產(chǎn)物或使宿主生物具備所需的性狀 ， 同時(shí)目的基因還能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳 。 ? 一般克隆基因的檢查和鑒定方法 ? 瓊脂
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