重組dna技術1-資料下載頁
2024-11-17 23:21本頁面
【導讀】分子克隆–DNA的無性繁殖技術。重組DNA技術包括了一系列的分子生物學操。重組DNA技術的重大突破帶動了現(xiàn)代生物技。達的操作叫基因工程?；蚬こ炭墒沽硪环N生物獲得新的遺傳性狀或。表達所需要的產物。成新的重組DNA分子；對轉化子篩選和鑒定；胞或生物體通過培養(yǎng)，，從中調用目的基因；細胞內總DNA的提取分離程序。紫外分光光度計測定DNA溶液的純度和濃度?；蚪MDNA文庫的構建。電泳分離不同長短的DNA片段。包含的基因組片段。反轉錄人工合成互補DNA,cDNA. PCR技術就是在體外中通過酶促反應有選擇地大量。作為模板的DNA序列；變性、退火、延伸。每一輪聚合酶鏈式反應可。限制性內切酶是從細菌中分離提純的核酸內切酶，Arber、Smith和Nathans因為在發(fā)現(xiàn)限制性內切酶。方面開創(chuàng)性工作而共同獲得了1978年的諾貝爾獎。已經發(fā)現(xiàn)和鑒定了200多種。載體是運送目的基因片段進入宿主細胞的工具，質粒是細菌細胞中自然存在于染色體外可以自主復。制的一段環(huán)狀DNA分子。將目的基因克隆到大腸桿。胞，進行檢查或鑒定。
【正文】 定位作圖 2. 用 RFLP把超大片段分割成10多個包含 100 kb的大片段 ，做出它們的物理圖 3. 用酵母人工染色體 (YACs）或其他載體構建包含其中小片段的一系列重疊的克隆 ，約 ～ Mb 4. 對小片段逐個進行測序 ，進而實現(xiàn)對整個染色體的測序和作圖 ? 1992年，酵母 3號染色體 DNA的全部 315 357個堿基序列的測定，這是人類完成的第一條真核生物染色體 DNA的全序列。 ? 1995年，科學家們獲得了人類第 第 16和第 22號染色體的高密度物理圖。 ? 1996年，科學家們完成酵母其他 15條染色體的堿基序列測定。 ? 1997年，大腸桿菌基因組序列測定宣告完成。 ? 1999年 12月 1日，科學家們宣布，人類第 22號染色體，含 107個堿基序列的測定已經全部完成，這是人類完成的第一條人類自身染色體的全序列測定。 ? 2020年 6月 26日，人類基因組工作框架圖完成，標志著功能基因組時代的到來。 ? 科學家們對人類基因組的性質和作用的認識在不斷地深化。 ? 未來：健康領域、基礎科學研究領域 …… ? 2020年 2月 12日美、英、日、法、德、中六國科學家，以及 Celera 公司聯(lián)合公布人類基因組圖譜，及初步分析結果 ? NATURE | VOL 409 | 15 FEBRUARY 2020 | ? SCIENCE| |16 FEBRUARY ? 2020 | 重組 DNA技術的一般操作步驟有： (1)獲得目的基因； (2)構建重組質粒； (3)轉化受體細胞； (4)篩選和鑒定轉化子； (5)培養(yǎng)轉化細胞獲得所需性狀或所需產物。 獲得目的基因的方法有：提取總 DNA構建基因文庫并從中調用；以 mRNA為模板合成互補 DNA片段；利用 PCR特異性擴增所需目的基因片段等。用紫外分光光度計測定 DNA溶液的純度和濃度。 用限制性內切酶識別并切開核酸序列特定位點，將外源基因插入到載體中，用重組載體轉化宿主細胞，外源基因將隨宿主的繁殖而復制，這種過程稱為基因的克隆。 凝膠電泳是用于分離、純化和鑒定 DNA片段最常規(guī)的實驗技術。可依據 DNA分子的大小來使其分離。還可以利用 DNA雜交技術直接鑒定帶有重組質粒的細菌克隆。 利用載體法或基因直接轉移等技術將外源目的基因轉入合適的宿主細胞中進行表達，獲得所需表達產物或所需性狀。用 Southern雜交對轉基因生物外源目的基因進行檢測分析。 本章摘要 1． 該質粒 比較小 ， 可以插入一段較長的 DNA片段 。 2． 進入宿主細菌細胞后 ， pUC18在每個細胞中可 復制形成大約 500個拷貝 。 3． 在 pUC18中有一小段人為設計和插入的具有多種限制性酶切位點的序列 ， 即 多克隆位點 ? 細菌質粒 pUC18 思考題 克隆載體包括哪些基本的結構元 件 , 簡述 DNA克隆的過程
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