17-dna重組技術(shù)-資料下載頁
2025-01-15 00:20本頁面
【正文】 行生物化學(xué)研究提供了條件。如果知道一個被克隆的 DNA片段的側(cè)接順序，就能利用多聚酶鏈式反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR)擴增這個 DNA片段，這樣擴增的 DNA片段能直接用作目的基因或用于生物化學(xué)與分子生物學(xué)分析過程。 該技術(shù)是 Kary Mullis 在 1984年發(fā)明的，主要是根據(jù)DNA復(fù)制的基本原則，用于特定 DNA片段的體外擴增。 PCR技術(shù) 原理示意圖 靶序列 變性和引物復(fù)姓 循環(huán) 1 循環(huán) 2 循環(huán) 3 變性和引物復(fù)性 鏈延伸 Tag酶 鏈延伸 PCR技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用 ?末知序列的 PCR擴增； ?將逆轉(zhuǎn)錄與 PCR相偶聯(lián) （ RTPCR）； ?用于 DNA的測序； ?用于基因定位誘變； ?用于合成特異探針； ?基因組序列的比較研究； ?用于臨床診斷。 基因組測序提供最完善的基因文庫 ?人類基因組測序?qū)嵤┑某晒粌H僅是獲得生物學(xué)迅速發(fā)展的數(shù)據(jù)庫，而且改變了人類對自身的思維； ?人類基因組 DNA只有 %%用于 編碼蛋白質(zhì) ，獨特的基因表達模式能使一個基因產(chǎn)生更多的蛋白質(zhì)，這是人類和其他脊椎動物比細菌、蠕蟲等簡單生物優(yōu)越的地方； ?在人類群體中大約有幾百萬個堿基的區(qū)別，即所謂單核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide polymorphism， SNP)；這些微小的差異產(chǎn)生了人類個體的差異性。 ?國際數(shù)據(jù)庫中大量的數(shù)據(jù)信息不斷增加，它們具有不可估量的價值。 人類基因組各種順序組成圖 轉(zhuǎn)座子（ 45%） 其他基因間DNA（ %） 長重復(fù)順序（ 5%） 簡單重復(fù)順序(衛(wèi)星 DNA,3%） 轉(zhuǎn)錄成 RNA分子順序 (25%） 編碼蛋白質(zhì)(～ %) 序列和結(jié)構(gòu)相關(guān)性提供蛋白質(zhì)功能的信息 ?利用“比較基因組學(xué)”研究方法，能通過基因組 DNA同源序列比對確定基因的功能； ?在一些蛋白質(zhì)內(nèi)可以找出特殊結(jié)構(gòu)模序 (motif)相關(guān)的 DNA或氨基酸順序，可以幫助鑒定蛋白質(zhì)的分子功能； ?為了進一步進行基于結(jié)構(gòu)相關(guān)性的蛋白質(zhì)的功能鑒定，可盡可能多的獲取還沒有現(xiàn)有功能信息的蛋白質(zhì)結(jié)晶，測定它們的結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域，并將其納入結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫，通過與數(shù)據(jù)庫中已知功能蛋白質(zhì)的模序比對來獲取這些未知蛋白質(zhì)的功能信息 。 蛋白質(zhì)技術(shù)和核酸技術(shù)的相互增強 插入表達載體 轉(zhuǎn)化寄主細胞 推導(dǎo)出AA順序 制備合成肽 制備對所編碼蛋 白專一的抗體 基因或cDNA 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) 測定出AA順序 合成 cDNA探針 制備專一的抗體 沉淀核糖體分離 mRNA 用 Southern印跡法篩選 DNA文庫 基因或cDNA DNA芯片 (DNA chip)技術(shù)是采用寡核苷酸原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計的 DNA探針片段有序地固化于支持物表面上，產(chǎn)生二維 DNA探針陣列，然后與標記的樣品進行雜交，反應(yīng)結(jié)果通過檢測雜交信號的方法（同位素法、化學(xué)熒光法、化學(xué)發(fā)光法或酶標法）顯示，再用精密的掃描儀或 CCD攝象技術(shù)記錄，通過計算機軟件分析，綜合成可讀的 IC總信息，來實現(xiàn)對生物樣品的快速、并行、高效地檢測或診斷。 芯片分析實際上也是傳感器分析的組合。芯片陣列中的每一個單元微點都是一個傳感器的探頭，所以傳感器技術(shù)的精髓往往都被用于芯片的發(fā)展。陣列檢測可以大大提高檢測效率，減少工作量，增加可比性，所以芯片技術(shù)也是傳感器技術(shù)的發(fā)展。 DNA芯片技術(shù)簡介 DVA芯片工作示意圖 emission Laser 1 Laser 2 puter analysis DNA clones test reverse transcription Label with fluor dyes PCR amplification purfication hybridize target to microarray robotic printing reference 演講完畢，謝謝觀看！
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