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dna重組技術(shù)概述-資料下載頁

2025-01-08 01:53本頁面
  

【正文】 染法 ? 6. 脂質(zhì)體介導(dǎo)法 ? 7. 細(xì)胞融合法 ? 8. 原生質(zhì)體融合法 ? 9. 微細(xì)胞介導(dǎo)法 大腸桿菌感受態(tài)的制備 ? ( 1)接種單菌落于 2ml LB培養(yǎng)液中, 37℃ 過夜。 ? ( 2)取 25ml LB培養(yǎng)液中, 37℃ 振搖4~ 6h至 A590=~ 。 ? ( 3)倒入 50ml管內(nèi),水浴 10min,以 2500~ 3000rpm離心 5min,棄上清。 ? ( 4)緩慢加入 75mmol/L預(yù)冷 CaCl2 5ml懸浮菌體,冰浴 20min,同上離心棄上清。 ? ( 5)緩慢加入 75mmol/L預(yù)冷 CaCl2 分裝在 Eppendorf管中,每管 200μl,冰浴 1~ 2h。 重組 DNA的轉(zhuǎn)化 ? ( 1)將 3只 Eppendorf管按下列組作好標(biāo)記,然后按下述進(jìn)行: ? 轉(zhuǎn)化組:受體菌+重組 DNA ? 陰性對照組:受體菌 ? 陽性對照組:受體菌+陽性 DNA ? ( 2)冰浴 30min至 1h。中間搖動 3次,以防受體菌沉底。 ? ( 3) 42℃ 90s。 ? ( 4) 37℃ 水浴 5min。 ? ( 5)加入無相應(yīng)抗生素的 Lb 200μl,混勻后, 37℃ 水浴 30~60min。 ? ( 6)分別取 3組反應(yīng)物各 50μl在含相應(yīng)抗生素的固體 LB培養(yǎng)基平皿上涂布,室溫下干燥,然后倒置于 37℃ 溫箱中培養(yǎng)過夜。 ( 五 ) 重組體的篩選 直接選擇法 1. 抗藥性選擇 2. 標(biāo)志補救 3. 分子雜交法 間接篩選法 核酸水平 *1. 酶切圖譜 *2. 核酸探針 *3. PCR *4. 序列測定 蛋白質(zhì)水平 免疫學(xué)的技術(shù): SDS P A G E 、Western blot、ELISA、 放免 、免疫沉淀 、 熒光 抗體 等 (六)克隆基因的表達(dá) 表達(dá)體系的建立 表達(dá)載體的構(gòu)建 受體細(xì)胞的建立 表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 1、原核表達(dá)體系 2、真核表達(dá)體系 第三節(jié) 重組DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué) 的關(guān)系 (一)疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆 (二)生物制藥 (五)遺傳病的預(yù)防 1、產(chǎn)前診斷 2、攜帶者測試 3、癥候前診斷 4、遺傳病易感性預(yù)測 演講完畢,謝謝觀看!
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