dna重組技術(shù)-資料下載頁
2025-01-08 01:53本頁面
【正文】 標(biāo)記的反義 RNA 特異性 mRNA 退火 雙鏈 RNA被保護(hù) RNase 標(biāo)記的反義 RNA 非特異性 mRNA 反義 RNA 不能退火 RNase 單鏈 RNA被降解 凝膠電泳及放射自顯影分析 RNA酶保護(hù)實驗原理 目 錄 引物 1 mRNA 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 雜化雙鏈 RNADNA 引物 2 與引物 2退火 cDNA 第一輪 PCR 引物 2重復(fù) PCR 產(chǎn)物 反轉(zhuǎn)錄PCR原理 目 錄 DNA微陣列示意 目 錄 第 五 節(jié) 重組 DNA技術(shù)在生物學(xué) 及醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 Applications of Rebinant DNA Technology in Biology and Medicine 目 錄 （ 一 ） 大腸桿菌 （ E. coli） 原核表達(dá)系統(tǒng)簡便 、經(jīng)濟(jì)而高效 （二） 很多修飾蛋白質(zhì)可在真核表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生 1. 非整合基因在宿主細(xì)胞呈瞬時表達(dá) 2. 整合基因在宿主細(xì)胞呈穩(wěn)定表達(dá) （三）克隆基因所編碼的蛋白質(zhì)也可經(jīng)體外翻譯而獲得 一、 克隆的基因可表達(dá)具有生物活性的蛋白質(zhì) 目 錄 標(biāo)準(zhǔn)： 選擇標(biāo)志 強(qiáng)啟動子 翻譯調(diào)控序列 多接頭克隆位點(diǎn) 不宜表達(dá)真核基因組 DNA 不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì) 表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體 (inclusion body) 很難表達(dá)大量可溶性蛋白 原核表達(dá)體系 （ ） 大鼠胰島素原 cDNA 的表達(dá)和分泌 目 錄 目 錄 目 錄 優(yōu)點(diǎn)： 可表達(dá)克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì) 表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累 缺點(diǎn)： 操作技術(shù)難、費(fèi)時、不經(jīng)濟(jì) 轉(zhuǎn)染 ： 將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程 方法： 磷酸鈣轉(zhuǎn)染 DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 電穿孔 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 顯微注射 真核表達(dá)體系 酵母、昆蟲、乳類動物細(xì)胞 目 錄 真核表達(dá)載體 pcDNA3的物理圖譜 目 錄 表達(dá)載體 pFASTBACI 的物理圖譜 目 錄 目 錄 （一）利用定點(diǎn)突變可研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 （二）定點(diǎn)突變技術(shù)在蛋白質(zhì)工程中有特殊的意義 二、基因定點(diǎn)突變技術(shù)可用于蛋白質(zhì)功能研究或改造蛋白質(zhì) 目 錄 三、 RNA干擾導(dǎo)致基因沉默可研究基因的功能 RNA干擾 (RNAi)的機(jī)制 目 錄 四、轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究基因的生物學(xué)功能 （一）采用受精卵顯微注射可獲得轉(zhuǎn)基因小鼠 （二）基因打靶可修飾或替換固有基因 （三）利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立人類疾病的動物模型 五、重組 DNA技術(shù)加速了基因工程藥物與疫苗的開發(fā) 目 錄 將篩選的ES注入內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 植 入 假孕 母 鼠子宮 胚胎干細(xì)胞 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 胚泡 原核 受精卵 待轉(zhuǎn)入 基因 植入假孕母鼠子宮 同源重組敲出基因 篩 選 基 因敲出的 ES細(xì)胞 含目的基因的外源同源基因載體 雜 合子 后代交 配以 獲得純 合子 轉(zhuǎn)基因 或基 因敲出動物 檢測子代是否存在轉(zhuǎn)移基因或基因敲出 制備轉(zhuǎn)基因小鼠和小鼠基因打靶示意 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 目 錄 目 錄 基因診斷 (gene diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 六、醫(yī)學(xué)中應(yīng)用重組 DNA技術(shù)進(jìn)行基因診斷與基因治療 基本過程 區(qū)分或鑒定 DNA的異常 分離、擴(kuò)增待測的 DNA片斷 (一 )重組 DNA技術(shù)是疾病分子診斷的有力工具 目 錄 標(biāo)準(zhǔn) . 能正確擴(kuò)增靶基因； . 能準(zhǔn)確區(qū)分單個堿基的差別； . 便于完全自動化操作，適合大面積、大人群普查。 目 錄 （二）重組 DNA技術(shù)對遺傳疾病的基因治療具有巨大的潛能 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細(xì)胞補(bǔ)充相應(yīng)功能的基因 ， 以糾正或補(bǔ)償其基因的缺陷 ， 從而達(dá)到治療的目的 。 方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 目 錄 演講完畢，謝謝觀看！
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1