重組dna技術(shù)1(完整版)
【正文】 糖凝膠電泳分離鑒定大小不等的酶解片段： 磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷 酶解片段 向陽(yáng)極移動(dòng) 電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)力和凝膠阻力 ——不同遷移率 分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物 ? 酶切和電泳方法 Restriction mapping 酶切 克隆基因的檢查和鑒定方法 ? 32P標(biāo)記的 DNA分子探針 ? 雜交 ? 放射自顯影法 ? DNA雜交直接鑒定 ? 植物遺傳轉(zhuǎn)化常用的方法 ? 載體法轉(zhuǎn)化 —— 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法 （ Ti質(zhì)粒 ） ? 基因的直接轉(zhuǎn)移 （ 1） 高壓電脈沖電激穿孔 （ 2） 基因槍法 （ 3） 微注射法 ? 構(gòu)建缺失 chlL基因的藍(lán)細(xì)菌突變株 （ 直接轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒 ） ? 紀(jì)念發(fā)明者 Edward Southern （ 1） 提取總 DNA （ 2） 酶解 （ 3） 電泳 （ 4） 轉(zhuǎn)移到濾膜 （ 5） 變性解鏈 （ 6） DNA探針及雜交 （ 7） 洗脫 （ 8） 放射自顯影 （ 9） 比較分析 轉(zhuǎn)化子的分析 —— Southern雜交 鑒定克隆 Southern分子雜交 ? Southern雜交分析示例 A. DNA體外重組實(shí)驗(yàn) B. 抗生素篩選轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 C. 培養(yǎng)突變株細(xì)胞 D. Southern雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 ， 外源目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入突變株細(xì)胞中 ? 1973年 ， 由美國(guó)斯坦福大學(xué)教授 Cohn和美國(guó)加州大學(xué)教授Boyer帶領(lǐng)各自的研究組幾乎同時(shí)分別完成了 DNA體外重組 ，一舉打開(kāi)了基因工程學(xué)大門 。 ? 2020年 6月 26日，人類基因組工作框架圖完成，標(biāo)志著功能基因組時(shí)代的到來(lái)。還可以利用 DNA雜交技術(shù)直接鑒定帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌克隆。用 Southern雜交對(duì)轉(zhuǎn)基因生物外源目的基因進(jìn)行檢測(cè)分析。 ? 未來(lái)：健康領(lǐng)域、基礎(chǔ)科學(xué)研究領(lǐng)域 …… ? 2020年 2月 12日美、英、日、法、德、中六國(guó)科學(xué)家，以及 Celera 公司聯(lián)合公布人類基因組圖譜，及初步分析結(jié)果 ? NATURE | VOL 409 | 15 FEBRUARY 2020 | ? SCIENCE| |16 FEBRUARY ? 2020 | 重組 DNA技術(shù)的一般操作步驟有： (1)獲得目的基因； (2)構(gòu)建重組質(zhì)粒； (3)轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞； (4)篩選和鑒定轉(zhuǎn)化子； (5)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞獲得所需性狀或所需產(chǎn)物。 研究目標(biāo) 擬在 15年內(nèi)至少投入 30億美元，完成對(duì)人基因組 30億個(gè)堿基對(duì)的順序分析，完成對(duì)人基因組中全部堿基定位，并開(kāi)展模式生物基因組研究。 ? 若需要讓克隆的基因表達(dá)和產(chǎn)生大量編碼蛋白 ， 可對(duì)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)使目的基因大量表達(dá)和積累 。 ? 加入 4種物質(zhì) ： （ 1） 作為模板的 DNA序列； （ 2）與被分離的目的基因兩條鏈 各自 5’端序列相互補(bǔ)的DNA引物（
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1