重組dna技術1-展示頁
2024-11-29 23:21本頁面
【正文】 細胞內復制 ， 轉錄 ， 翻譯表達的操作叫基因工程 。11 重組 DNA技術 重組 DNA技術是基因工程的核心技術 獲得需要的目的基因 （ 外源基因 ） 構建重組質粒和基因克隆 轉化受體細胞和轉化子的篩選 轉化子的分析 —— Southern雜交 重組 DNA技術 ， 又稱為 基因克隆 或 分子克隆技術 ， ? 克隆 (clone)無性繁殖 ? 分子克隆 – DNA的無性繁殖技術 ? 重組 DNA技術 包括了一系列的分子生物學操作步驟 。 ? 重組 DNA技術的重大突破帶動了現代生物技術的興起 ， 并很快產生了許多生命科學的高技術產業(yè) 。 ?基因工程可使另一種生物獲得新的遺傳性狀或表達所需要的產物 。 ?獲得需要的目的基因常用的方法： （ 1） 直接從生物體中 提取總 DNA， 構建基因組 DNA文庫(genomic DNA library)， 從中調用目的基因； （ 2） 以 mRNA為模板 ， 反轉錄合成互補的 DNA片段 ， 建立cDNA文庫； （ 3） 利用聚合酶鏈式反應 （ PCR） 特異性地擴增 所需要的目的基因片段 ， 等等 。 ? 基因組 DNA文庫的構建 將總 DNA經過酶解 ， 經蔗糖梯度離心或瓊脂糖凝膠電泳分離不同長短的 DNA片段 。 cDNA文庫的構建 mRNA 反轉錄 cDNA (互補 DNA） 第二條 DNA鏈 ? 反轉錄人工合成互補 DNA, cDNA ? 構建基因文庫獲取目的基因存在的問題 —— 費時費事 內含子序列 ? 反轉錄人工合成 互補 DNA方法的優(yōu)勢 —— 獲取的 DNA片段往往是具有特定功能的目的基因 ? 聚合酶鏈式反應 （ PCR） ? PCR技術就是在體外中通過酶促反應有選擇地大量擴增（包括分離）一段目的基因的技術。 ? 聚合酶鏈式反應 （ PCR） ?變性、退火、延伸三步曲 ?變性 ： 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火 ： 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補部位相配對和結合 ?延伸 ： 以目的基因為模板，合成互補的新 DNA鏈 ? 聚合酶鏈式反應 （ PCR） ?每一輪聚合酶鏈式反應可使目的基因片段增加一倍 ?30輪循環(huán)可獲得 —— 230（ 109)個基因片段 PCR(多聚酶鏈式反應 ) ? PCR技術的發(fā)明 ? PCR的發(fā)明是 DNA操作技術的革命 ? 美國 Mullis教授 開汽車時的聯想 逶迤崎嶇的山路 —— DNA雙螺旋 行駛的汽車 —— 一小段 DNA引物 …… 1988年發(fā)明了 PCR技術 1993年獲得諾貝爾獎 ? 基因重組和克隆操作最重要的工具是： 和
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