抗體分子改造ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-04-29 02:28本頁(yè)面
【正文】 24位的螺旋肽段外露，在外殼上排列緊密，占據(jù)了噬菌體的大部分表面。如有稍大肽段插入，將會(huì)影響外殼的穩(wěn)定性。 （ 4） N端 1～ 5位的氨基酸序列是丙氨酸 谷氨酸 甘氨酸 門(mén)冬氨酸 門(mén)冬氨酸（ AEGDD），它外露于噬菌體表面，是外源肽段插入的最佳位置。 ? 利用這一系統(tǒng)可以構(gòu)建表達(dá)性基因文庫(kù)，稱(chēng)為噬菌體呈現(xiàn)文庫(kù)。它最先被用于抗體基因文庫(kù)的構(gòu)建和篩選。雖然利用動(dòng)物的免疫可以獲得循環(huán)多克隆抗體，用細(xì)胞融合方法可以獲得單克隆抗體，但利用基因工程的技術(shù)構(gòu)建抗體基因庫(kù)，再篩選所需的特異性抗生，不僅擺脫了繁重的工作量，也可獲得大量的、穩(wěn)定的抗體。而且隨著研究的不斷深入和發(fā)展，抗體的多樣性，親和力也大有提高。 ? 在構(gòu)建噬菌體呈現(xiàn)抗體文庫(kù)技術(shù)中，主要有 3個(gè)特點(diǎn)： （ 1）可用抗原制備出免疫吸附劑，將文庫(kù)的噬菌體與其反應(yīng)，再經(jīng)洗滌、洗脫得以捕獲和純化，將這種表達(dá)所需的特異性抗體的噬菌體感染大腸桿菌而得到繁殖。如此經(jīng)過(guò)親和結(jié)合 → 洗滌 → 洗脫 → 繁殖的富集過(guò)程，稱(chēng)為 “ panning”（淘選），一輪paning便可富集 1000倍。如此簡(jiǎn)便、高效率，是其他方法比似的。 ? （ 2）親和力成熟過(guò)程可由體內(nèi)轉(zhuǎn)為體外。如前所述，抗原物質(zhì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體的再次免疫，可獲得高親和力的抗體。這種在體內(nèi)出現(xiàn)的親和力成熟的現(xiàn)象，是由于細(xì)胞抗體基因在 CDRS區(qū)域突變，再通過(guò)表面呈現(xiàn)技術(shù)加篩選，便可獲得親和力的特異抗體 ? （ 3）這種方法不僅可以獲得單鏈抗體，也可制備出重鏈、輕鏈結(jié)合的抗體（ Fab）片段。 外源基因編碼的肽段在融合蛋白的 N端，呈現(xiàn)在噬菌體表面時(shí)， C端錨著在膜上， N端是游離的，能夠正確折疊，也可以形成二硫鏈。 如果在插入基因與編碼成熟 gp8序列間放置amber終止碼（ TAG），則 TAG就是蛋白質(zhì)合成的終止信號(hào)，合成的多肽以非融合蛋白的形式分泌在內(nèi)膜與細(xì)胞壁間的周質(zhì)中，進(jìn)而還能進(jìn)入培養(yǎng)基中。利用這些特性，可將 Fc蛋白錨著于細(xì)胞膜上，在周質(zhì)中的分泌的輕鏈分子可與重鏈原位組裝。形成完整的 Fab片段積累在膜表面。
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