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抗體工程制藥ppt課件-資料下載頁

2025-01-05 10:53本頁面
  

【正文】 全合成法 是以人抗體序列為骨架,以鼠抗體的 CDR置換人抗體的 CDR,將整個可變區(qū)序列的兩條鏈分解成若干片段,并使相鄰的片段具有彼此互補的粘性末端。合成所有 DNA片段,每組片段分別退火,然后逐組連接成完整的可變區(qū)基因,插入質(zhì)粒中,進一步即可用于構(gòu)建和表達改形抗體。 定點突變法 是將人的可變區(qū)基因克隆,根據(jù)鼠抗體的 CDR 序列合成幾種突變引物,用定點突變的方法將人的可變區(qū)基因的 CDR序列變?yōu)槭罂贵w的 CDR序列,然后表達出改型抗體。 研究表明,在構(gòu)建改形抗體時,簡單地進行CDR替換并不能保證抗體具有好的親和力,因此在構(gòu)建時還必需包括 對影響抗原結(jié)合位點的空間結(jié)構(gòu)的框架序列 進行操作。 ?Fab: 抗原結(jié)合片斷 ?Fv: 可變區(qū)片段 ?ScFv: 單鏈可變區(qū)片段 ?單域抗體 ?最小識別單位 分子量較小但具有抗原結(jié)合功能的分子片段。 基因工程小分子抗體僅表達鼠源性單克隆抗體的 V區(qū)片段,其相對分子質(zhì)量僅為原抗體 1/801/3。 Fv ScFv 單區(qū)抗體 最小識別單位 Fab 由完整的 輕鏈和 Fd組成,大小為完整分子的 1/3。 把 Fab與細菌的前導肽相連,在前導肽的作用下Fab進入質(zhì)周腔,裝配折疊后,它具有結(jié)合抗原的活性。 (1)Fab Fv、 ScFv的大小約為全分子的 1/6。 (2)Fv 或 ScFv Fv ScFv 連接肽 ?Fv由 VH與 VL構(gòu)成,由于其結(jié)合是非共價結(jié)合,故 Fv不穩(wěn)定。在 VH與 VL之間加上一段連接肽,把VH與 VL連成一條單鏈,得到 ScFv,即單鏈抗體 。連接肽 的長度在 1015個氨基酸左右,不宜太長或太短,它應(yīng)具有柔軟性,側(cè)鏈少,抗原性弱等特點。常用的連接肽是 (GGGGS)3。 ?單鏈抗體 的構(gòu)建在已知親本 DNA序列時可用完全 人工合成法 ?單鏈抗體最常用的表達體系是 大腸桿菌 即為 VH,約為完整分子的 1/12。它只由一個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成,故稱 單域抗體。 單域抗體盡管親和力有所降低,但仍保持著原單抗的特異性。 (3)單域抗體 VH 約為完整分子的 1/801/70大小,一般由一個 CDR構(gòu)成,它也保持著抗體的特異性。 (4)最小識別單位 CDR ① 可以用細菌發(fā)酵生產(chǎn),成本低 。 ② 分子小,穿透力強 。 ③ 不含 Fc,沒有 Fc帶來的效應(yīng) 。 ④ 在體內(nèi)循環(huán)的半衰期短,易清除,利于解毒排出 。 ⑤ 易于與毒素或酶基因連接,便于直接獲得免疫毒素或酶標抗體等 。 小分子抗體的優(yōu)點及應(yīng)用 應(yīng)用: ① 用于腫瘤的導向治療 ② 腫瘤的影像分布 ③ 基因治療 優(yōu)點 : 、雙特異性抗體和多價抗體 雙鏈抗體 ( Diabody)一詞最早由Hollinger等于 1993年創(chuàng)造。乃是一種小分子的雙價雙特異性抗體片段。 雙特異性抗體 (bispecific antibody,BSAb)是指能同時識別 2種抗原的抗體。 1種為對應(yīng)腫瘤相關(guān)抗原。另 1種為對應(yīng)效應(yīng)成分。 即能 結(jié)合靶腫瘤細胞 又能 結(jié)合高細胞毒性的效應(yīng)細胞 ,將效應(yīng)細胞富集在腫瘤周圍 ,而且可以模擬天然配體的作用 ,與細胞表面引發(fā)分子結(jié)合 ,激活效應(yīng)細胞 ,實現(xiàn)對腫瘤細胞的殺傷和裂解。 Hollinger等巧妙地將A抗原抗體的輕鏈可變區(qū)基因 (VLA)與抗B抗原抗體的重鏈可變區(qū) (VHB)通過短肽連接子連接 。同樣地 ,將 VHA與 VLB連接 ,將兩組 嵌合基因 置于雙順反子的表達質(zhì)粒中 ,構(gòu)建成雙鏈抗體的表達質(zhì)粒 ,目前報道的表達質(zhì)粒均為雙順反子。表達后 ,VLA VHB與 VHA VLB交叉連結(jié) ,形成雙特異性抗體。 所以雙特異性抗體與既往腫瘤免疫治療相比 ,除了能 特異性識別腫瘤細胞 外 ,還能 將循環(huán)血液中的免疫效應(yīng)細胞再導向至腫瘤細胞處 ,從而使效應(yīng)細胞的抗腫瘤活性增強 ,發(fā)揮免疫導向作用 ,這是腫瘤治療的新突破。 從廣義講應(yīng)屬于雙功能抗體范疇。 ( 1)配基 — 配基型融合蛋白,如 CD4Fcγ. ( 2)配基 — Ig型嵌合抗體,如 IL2Ig ( 3)配基 — FV型嵌合蛋白,如 CD4FVCD3 (4) 受體 — FV型融合蛋白 ( 5)酶 — 抗體型融合蛋白( abeneyme,抗體酶) 、抗體融合蛋白
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