抗體的制備與應(yīng)用ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-03-22 06:09本頁(yè)面
【正文】 鉸鏈、黏性蛋白結(jié)構(gòu)域融合法和接頭長(zhǎng)度控制三種主要手段將兩個(gè) ScFv通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成剛性、穩(wěn)定的二聚體結(jié)構(gòu)。具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，分子量約 60KD。具有穿透力強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，易于通過(guò)血管壁進(jìn)入實(shí)體瘤。與 ScFv比較，其腎臟的清除速度減慢。具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值。 2．微型抗體 (minibody) ? 采用基因工程的手段，使用不同的接頭把單鏈抗體(VLVH)的 VH功能區(qū)與 IgG的 CH3功能區(qū)融合，構(gòu)成 VLVHCH3的融合蛋白，稱之為微型抗體（ minibody）。該抗體合成后通過(guò) CH3功能區(qū)形成穩(wěn)定的二聚體，發(fā)揮其雙價(jià)抗體的作用。微型抗體的分子量約為 80KD，較雙鏈抗體 (約 60KD)的大，降低了體內(nèi)清除速度，增加了滯留時(shí)間。此抗體具有（ Fab’） 2的類似性質(zhì)，但沒(méi)有（ Fab’） 2需對(duì)完整抗體進(jìn)行酶切消化及二次純化的繁瑣過(guò)程，是一種較為理想的基因工程抗體形式。 3．三鏈抗體 (triabody) ? 制備單鏈抗體時(shí)，把接頭的長(zhǎng)度降 2個(gè)或 2個(gè)以下氨基酸殘基，或者直接把 VH功能區(qū)的 N末端與 VL功能區(qū)的 C末端相連，這樣可通過(guò)非共價(jià)鍵形成三聚體，稱為三鏈抗體。 VH和 VL直接連接構(gòu)成無(wú)連接肽（ ScFv0）三聚體的親和力高，其與抗原結(jié)合比較牢固，解離速度慢。 （二）新型抗體分子 ? 1．新效能抗體 ? 2．雙特異性抗體（ bispecific antibody,BsAb） ? 3．胞內(nèi)抗體（ intrabody） ? 4．免疫黏連素（ immunoadhesin） ? 5．催化抗體（ catalytic antibody） 1．新效能抗體 ? 通過(guò)基因拼接、化學(xué)交聯(lián)等多種方法，將抗體分子與酶、化學(xué)藥物、放射性核素、生物毒素、超抗原等相結(jié)合。通過(guò)抗體發(fā)揮導(dǎo)向或載體效應(yīng)，使抗體攜帶物靶向結(jié)合于特異細(xì)胞上，發(fā)揮抗體攜帶物的效應(yīng)功能。 2．雙特異性抗體（ bispecific antibody,BsAb） ? 又稱雙功能抗體（ bifunction alantibody,BFA），具有兩個(gè)能結(jié)合不同特異性抗原位點(diǎn)的抗體。具有小分子抗體低副作用，又能有效促進(jìn)細(xì)胞或分子聚合，介導(dǎo)高效生物學(xué)效應(yīng)，在腫瘤、病毒感染治療中具有較大優(yōu)勢(shì)。 胞內(nèi)抗體（ intrabody) ?概念： 利用基因工程技術(shù)，在 ScFv抗體基因的 C端或 N段加上先導(dǎo)序列，使抗體分子定向分布于非淋巴細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞漿或某些特定的細(xì)胞器中表達(dá)，從而特異性干擾或阻斷分布于該部位的生物大分子的加工、分泌或活性，引起胞內(nèi)一系列生物過(guò)程改變的抗體。 ?胞內(nèi)抗體的構(gòu)建 ? 首先獲得 ScFv基因，再通過(guò) PCR技術(shù)在其 N或 C端插入胞內(nèi)定位信號(hào)序列。 N端定位信號(hào)序列可引導(dǎo)抗體進(jìn)入相關(guān)的細(xì)胞部位。而 C端信號(hào)序列可使抗體滯留在該細(xì)胞特定部位。 ? 常用的胞內(nèi)定位信號(hào)肽： ?核定位信號(hào)肽： PKKKPTV ?內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位信號(hào)肽： MWIWRILFVGAATGAAS ?內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)肽： KDEL ?胞內(nèi)抗體的作用機(jī)制 ? 抑制或穩(wěn)定大分子之間的相互作用，改變蛋白所在的區(qū)室。 ? 通過(guò)對(duì)配體的修飾使其功能喪失。 ? 通過(guò)調(diào)節(jié)酶或阻礙酶活性位點(diǎn)、隱蔽酶底物，使酶固定在活化或失活構(gòu)象。 4．免疫黏連素（ immunoadhesin） ? 抗體 C區(qū)和細(xì)胞膜表面受體或細(xì)胞黏附分子等細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)通過(guò)一定的方式連接后，在真核細(xì)胞表達(dá)出的抗體樣融合蛋白，稱為免疫黏連素。其不含抗體 Fab段，與抗原特異性無(wú)關(guān)，但與表達(dá)相應(yīng)受體或黏附分子的靶細(xì)胞結(jié)合后可發(fā)揮抗體的部分效應(yīng)功能，如 ADCC、 CDC等功能。 5．催化抗體（ catalytic antibody） ? 根據(jù)免疫學(xué)及有機(jī)化學(xué)的基本原理，利用基因工程技術(shù)制備的具有催化活性的抗體，不僅能與抗原特異性結(jié)合，還能促使其發(fā)生化學(xué)轉(zhuǎn)變。 ? 特點(diǎn)：能選擇性結(jié)合并降解病毒、腫瘤細(xì)胞及其它生理靶細(xì)胞表面表達(dá)的蛋白及碳水化合物。其高效催化活性及位點(diǎn)特異性蛋白降解作用為臨床疾病的治療提供新的途徑，有可能成為腫瘤導(dǎo)向治療的新方法。 四、基因工程抗體的應(yīng)用 （一）腫瘤 ? 基因工程抗體由于分子量小，滲透能力強(qiáng)，容易進(jìn)入腫瘤組織局部等優(yōu)點(diǎn)，可將細(xì)胞毒素、酶、藥物或放射性同位素偶連在抗體上，通過(guò)抗體的導(dǎo)向作用，特異性殺傷腫瘤組織或顯像。對(duì)術(shù)后殘留灶、術(shù)后復(fù)發(fā)、晚期腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移灶的診斷治療具有重要的意義。 （二）感染性疾病 ?病毒感染 ?細(xì)菌感染 （三）器官移植 ? 抗 IL2R人 /鼠嵌合抗體已進(jìn)入預(yù)防和治療移植排斥反應(yīng) Ⅲ 臨床實(shí)驗(yàn) ， 結(jié)果顯示：能使腎移植排斥反應(yīng)的發(fā)生率降低 29%。 （四）自身免疫性疾病 ? 美國(guó)已用抗腫瘤壞死因子的嵌合抗體治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，療效顯著。
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