抗體分子改造ppt課件(參考版)
2025-05-02 02:28本頁面
【正文】 形成完整的 Fab片段積累在膜表面。 如果在插入基因與編碼成熟 gp8序列間放置amber終止碼（ TAG），則 TAG就是蛋白質合成的終止信號，合成的多肽以非融合蛋白的形式分泌在內膜與細胞壁間的周質中，進而還能進入培養(yǎng)基中。這種在體內出現的親和力成熟的現象，是由于細胞抗體基因在 CDRS區(qū)域突變，再通過表面呈現技術加篩選，便可獲得親和力的特異抗體 ? （ 3）這種方法不僅可以獲得單鏈抗體，也可制備出重鏈、輕鏈結合的抗體（ Fab）片段。 ? （ 2）親和力成熟過程可由體內轉為體外。如此經過親和結合 → 洗滌 → 洗脫 → 繁殖的富集過程，稱為 “ panning”（淘選），一輪paning便可富集 1000倍。而且隨著研究的不斷深入和發(fā)展，抗體的多樣性，親和力也大有提高。它最先被用于抗體基因文庫的構建和篩選。 （ 4） N端 1～ 5位的氨基酸序列是丙氨酸 谷氨酸 甘氨酸 門冬氨酸 門冬氨酸（ AEGDD），它外露于噬菌體表面，是外源肽段插入的最佳位置。 （ 3）從第 6位的脯氨酸到 C末端是連續(xù)的 α 螺旋結構，6～ 24位的螺旋肽段外露，在外殼上排列緊密，占據了噬菌體的大部分表面。 （ 2） 25～ 35位肽段具有高度的疏水性，借此特性分子間相互聚合，形成固牢的外殼。實驗表明，在 gp gp gp9中插入外源蛋白，都會影響其構成外殼蛋白的功能，而在 gp8和 gp3的 N端插入外源蛋白后，形成的融合蛋白既可在噬菌體表面呈現，也不影響噬菌體的完整性和穩(wěn)定性。除 gp8外，不有 4種少量的外殼蛋白： gpgp gp7和 gp9，分別由基因 Ⅲ 、 Ⅵ 、 Ⅶ 、 Ⅸ 編碼，它們各有 5個拷貝。其中有 5種蛋白組成外殼蛋白，基因 Ⅷ（ g8）在野生型噬菌體中約有 2700～ 3000個考貝，它所編碼的 gp8蛋白是外殼蛋白的主要成分。 Ff絲狀噬菌體 ? Ff絲狀噬菌體呈柔性長絲狀，直徑約為 ,野生型體長約為 900nm。 ? 現在這一技術已被廣泛地用于抗體基因文庫， cDNA文庫、隨機多肽基因文庫和突變基因文庫的構建和篩選等諸
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