第三節(jié)聚合酶鏈反應(yīng)polymerasechainreaction,pcr-資料下載頁(yè)
【導(dǎo)讀】PCR是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制條件，應(yīng)用DNA聚。體外程序化的DNA合成技術(shù)。2）反應(yīng)體系：DNA模板，dNTP，TaqDNA聚合酶，2）微量的模板DNA即可擴(kuò)增大量產(chǎn)物;二聚體的可能減少，但它并不影響靶序列的擴(kuò)增，約經(jīng)15～20個(gè)循環(huán)后。補(bǔ)充產(chǎn)物量，以初級(jí)PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行擴(kuò)增，靶序列的產(chǎn)量將相應(yīng)增加。多重PCR常用來(lái)檢測(cè)同一基因的多個(gè)外顯子。的缺失，或在檢測(cè)缺失設(shè)置內(nèi)對(duì)照。RT-PCR是以mRNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作。mRNA的檢出靈敏度。應(yīng)用于基因表達(dá)與。是指單鏈DNA由于堿基序列不同可引起構(gòu)象差。據(jù)此，可用于DNA中單個(gè)堿基。在疑有突變的DNA片段附近設(shè)計(jì)一對(duì)引物，進(jìn)行。群體中每個(gè)個(gè)體（體細(xì)胞）的兩套單倍體DNA. 表型并沒(méi)有改變，這種表現(xiàn)稱(chēng)為DNA多態(tài)。除一卵雙生子外，沒(méi)有兩個(gè)個(gè)體的基因組DNA. 一限制酶切割時(shí)，產(chǎn)生DNA片段長(zhǎng)度的差異。首尾相連多次重復(fù)，稱(chēng)為串聯(lián)重復(fù)序列。引起了人們的極大關(guān)注?；蛐酒ㄓ址Q(chēng)DNA芯片，生物芯片，DNA探針微列。實(shí)現(xiàn)生物基因信息的大規(guī)模檢測(cè)。
【正文】 兩酶切點(diǎn)之間的串聯(lián)重復(fù)拷貝數(shù)不同，酶切后產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的片段。 20 VNTR 酶切，電泳后的檢測(cè)結(jié)果 大 小 21 PCRVNTR檢測(cè) 22 通常，重復(fù)單位 16～ 28bp長(zhǎng)，稱(chēng)為小衛(wèi)星 DNA。 重復(fù)單位２～ 6bp長(zhǎng)，如（ TA） n, (CGG)n等，稱(chēng)為微衛(wèi)星 DNA。 DNA多態(tài)可以通過(guò) PCR擴(kuò)增后電泳來(lái)檢出，稱(chēng)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)（ amplified fragment length polymorphism, AmpFLP） 23 PCRVNTR 24 生物芯片技術(shù) ? 九十年代以來(lái)，發(fā)展了一種新的分子生物學(xué)技術(shù)，引起了人們的極大關(guān)注。生物芯片，實(shí)際上是一種微型多參數(shù)生物傳感器。它通過(guò)在一微小的固體載體表面固定大量的分子識(shí)別探針，構(gòu)建一組微分析單元和系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)化合物，蛋白質(zhì)，核酸，細(xì)胞或其他生物組分準(zhǔn)確，快速，大量的篩選或檢測(cè)。 ? 基因芯片（又稱(chēng) DNA芯片，生物芯片， DNA探針微列陣），它集成了大量的密集排列的基因探針，通過(guò)與被檢測(cè)基因的堿基序列進(jìn)行互補(bǔ)配對(duì)，實(shí)現(xiàn)核酸序列的分子識(shí)別。能在同一時(shí)間內(nèi)分析大量的基因，實(shí)現(xiàn)生物基因信息的大規(guī)模檢測(cè)。 25 基因芯片 如： 靶基因 基因組 特異性片段 探 針 AGCTTAGC 靶序列 TCGAATCG probe A B C 1 2 3 4 5 檢測(cè) 26 基因芯片的應(yīng)用： 一、基因組掃描 二、尋找基因功能 三、基因型及單堿基多態(tài)（ SNP） 四、突變檢測(cè) 五、基因表達(dá)
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