第三節(jié)聚合酶鏈反應polymerasechainreaction,pcr(完整版)
【正文】 DNA聚合酶反應，特異性擴增某一 DNA片段的技術。 7 2. 巢式 PCR（ nest PCR） 此時也是進行二步 PCR，與上面不同的是，第二級 PCR需另行設置反應體系，并應用另外的 PCR引物，此時引物的位置位于初級 PCR引物的內(nèi)側，用初級 PCR產(chǎn)物做模板，進行第二步 PCR，這樣只有初級 PCR中特異的擴增片段才能被二級引物擴增。據(jù)此，可用于 DNA中單個堿基的替代，微小的缺失或插入的檢測。 ? 由于堿基的變異可能倒致限制酶切點的消失或新的酶切點出現(xiàn)，從而引起不同個體的 DNA在用同一限制酶切割時，產(chǎn)生 DNA片段長度的差異。 DNA多態(tài)可以通過 PCR擴增后電泳來檢出，稱擴增片段長度多態(tài)（ amplified fragment length polymorphism, AmpFLP） 23 PCRVNTR 24 生物芯片技術 ? 九十年代以來，發(fā)展了一種新的分子生物學技術，引起了人們的極大關注。它通過在一微小的固體載體表面固定大量的分子識別探針，構建一組微分析單元和系統(tǒng)，以實現(xiàn)對化合物，蛋白質，核酸，細胞或其他生物組分準確，快速，大量的篩選或檢測。 ? RFLP按孟德爾（共顯性）方式遺傳，是非常有用的遺傳標記。 ? 在疑有突變的 DNA片段附近設計一對引物，進行PCR擴增，其產(chǎn)物經(jīng)甲酰胺等變性，并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳（中性膠），突變所引起的 DNA構象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異，從而作出判斷。 8 ? 在同一 PCR體系中加入數(shù)對 PCR引物，如果這些引物的退火溫度相近，并且所覆蓋的區(qū)域不重疊，這樣的反應體系可同時擴增多個 DNA片段。 2 PCR 3 原 理： 1）合成待擴增區(qū)域兩端已知序列，與模板 DNA互補的寡核苷酸特異性引物，引物的序列決定擴增片段的長度； 2）反應體系： DNA模板， dNTP， Taq DNA聚合酶，buffer 3） 反應程序： 變性 94~95oC
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