應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位-資料下載頁
2025-04-04 23:21本頁面
【正文】 式下不易電離，因此我們都沒能得到這一肽段的質(zhì)譜峰。中性丟失掃描可以高靈敏度準確的定位磷酸化肽段。但不適于分析在復(fù)雜混合物中的相對含量較低的磷酸化肽段。2. IMAC法選擇性富集磷酸化肽段： 用1％甲酸水溶液將樣品稀釋為不同濃度（100fmol/μL, 500fmol/μL,2pmol/μL 5pmol/μL），各取 5μL分別用鉫離子親和色譜ZipTipMC處理，洗脫后取1μL 直接進行MAILDTof質(zhì)譜檢測，結(jié)果見圖3。結(jié)果表明經(jīng)濃度為2pmol/μL 以上的樣品ZipTipMC處理之后的樣品中非磷酸化肽段幾乎全部被除去，磷酸化肽段信號顯著增強；低于此濃度的樣品經(jīng)處理后質(zhì)譜圖中無磷酸化肽信號。AB圖3：2pmol/μl胰酶酶解混合物ZipTipMC處理前后的肽指紋譜。A為處理前；B為處理后，箭頭所指為磷酸化肽段有文獻報道不同的金屬離子富集磷酸化肽段的選擇性和靈敏度不同，我們選擇的金屬鉫離子是選擇性和靈敏度均比較理想的一種能金屬離子，其缺點是比較昂貴。另外，研究表明該方法具有一定的局限性：磷酸化肽段的損失，一部分磷酸化肽段不能吸附在色譜柱上，另外一部分磷酸化肽段難于洗脫下來。洗脫液可以用氨水或堿性緩沖鹽，前者的洗脫效率相對低，但無需脫鹽處理，后者的洗脫效率高，但脫鹽處理也會損失部分樣品。因此具體研究中還要根據(jù)具體要求優(yōu)化具體實驗參數(shù)。綜上所述，我們嘗試用不同方法對磷酸化蛋白的磷酸化肽段進行分析，定位磷酸化位點。但不同方法在進行磷酸化分析時各有優(yōu)點及局限性，在實際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)樣品情況和具體要求選擇應(yīng)用何種方法及具體條件。66 / 5
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