應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位(存儲(chǔ)版)
【正文】 rosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Denmark)是一次性使用的專用needle。該質(zhì)譜圖經(jīng)Micromass的專用軟件MaxEnt3處理后，用Micromass的專用軟件MasSeq直接推倒出肽段序列。二、結(jié)果與討論中性丟失掃描：1μL 1μg/μL βcasein酶解混合物用50％乙腈／水溶液稀釋為100μL（約500fmol/μL）注射泵進(jìn)樣，正離子中性丟失掃描模式掃描中性丟失49的雙電荷離子（圖1）。中性丟失掃描可以高靈敏度準(zhǔn)確的定位磷酸化肽段。因此具體研究中還要根據(jù)具體要求優(yōu)化具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)。另外，研究表明該方法具有一定的局限性：磷酸化肽段的損失，一部分磷酸化肽段不能吸附在色譜柱上，另外一部分磷酸化肽段難于洗脫下來(lái)。標(biāo)記處為磷酸化絲氨酸。反射檢測(cè)方式；；氮激光器：波長(zhǎng)337nm；加速電壓25KV；；反射電壓23KV。當(dāng)進(jìn)行手動(dòng)測(cè)序時(shí)，毛細(xì)管電壓為8001200V可得到穩(wěn)定的噴霧。2) 離子親和層析IMAC法富集磷酸化肽段：①％乙酸／50％乙腈／水溶液洗3次，②用200mM Ga(NO3)3溶液洗10次，③用超純水洗3次，④用1％乙酸／10％乙腈／水溶液洗3次， ⑤％乙酸／10％乙腈／水溶液洗5次，⑥蛋白質(zhì)酶解混合物用酸性溶液（20％乙酸或1％甲酸水溶液）調(diào)pH至2以下，用ZipTipMC吸取、排出10次以上，⑦％乙酸／10％乙腈／水溶液洗6次，⑧用超純水洗3次，⑨2－3μL ；3) 質(zhì)譜分析： 電噴霧質(zhì)譜儀為英國(guó)Micromass公司的電噴霧四極桿正交加速飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀QTOF2
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