應用生物質譜分析蛋白質磷酸化位點-生物質譜分析蛋白質磷酸化位(已修改)
2025-04-16 23:21 本頁面
【正文】 應用生物質譜分析蛋白質磷酸化位點項目完成人員：王紅霞 李衛(wèi)華 李愛玲 劉炳玉項目完成單位：軍事醫(yī)學科學院國家生物醫(yī)學分析中心摘 要 蛋白質的可逆磷酸化具有重要的生物學意義，對蛋白質磷酸化位點進行分析有助于闡明蛋白質磷酸化的機制與功能。生物質譜是目前進行蛋白質磷酸化分析最有力的方法之一。我們用天然磷酸化蛋白建立了中性丟失掃描和固相金屬親和色譜（IMAC）兩種基于質譜的磷酸化蛋白分析方法。應用這兩種方法均可將從蛋白質酶切混合物中找出磷酸化肽段，進而通過序列分析定位磷酸化位點。兩種方法具有不同的特點及局限性，具體研究中還要視具體情況優(yōu)化實驗條件。蛋白質可逆磷酸化是最普遍、最重要的一種蛋白質翻譯后修飾（PTM）。在哺乳動物中大約有三分之一的蛋白質被認為是磷酸化修飾的，對眾多生物化學功能起開/關調控作用，是一種普遍的調控機制。細胞內蛋白質的磷酸化在信號傳導中發(fā)揮著非常重要的作用。蛋白質組研究的一個重要方面就是蛋白質磷酸化修飾的分析鑒定。目前沒有一個自動測序方法能夠對三種主要的磷酸化氨基酸，即磷酸化絲氨基酸（pSer）、磷酸化蘇氨基酸（pThr）和磷酸化酪氨酸（pTyr）。毛細管電泳（CE）可以分析蛋白質或多肽的磷酸化及磷酸化氨基酸，但是鑒定蛋白質磷酸化位點首先要用高效液相色譜（HPLC）分離蛋白的酶解肽段，然后用CE篩測磷酸化肽，最后用自動Edman降解氨基酸分析法確定其磷酸化位點，工作量大，不是快速和高通量分析方法。生物質譜（MS）是揭示蛋白質許多翻譯后修飾和蛋白質一級結構分析的一個不可缺少的工具，所用的蛋白質樣品量在fmol水平。是唯一能夠與蛋白質組研究水平相匹配的方法
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