應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位(留存版)
【正文】 理后，箭頭所指為磷酸化肽段有文獻(xiàn)報(bào)道不同的金屬離子富集磷酸化肽段的選擇性和靈敏度不同，我們選擇的金屬鉫離子是選擇性和靈敏度均比較理想的一種能金屬離子，其缺點(diǎn)是比較昂貴。但不適于分析在復(fù)雜混合物中的相對(duì)含量較低的磷酸化肽段。Nanoflow probe進(jìn)樣毛細(xì)管電壓為3000v。其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。目前沒有一個(gè)自動(dòng)測(cè)序方法能夠?qū)θN主要的磷酸化氨基酸，即磷酸化絲氨基酸（pSer）、磷酸化蘇氨基酸（pThr）和磷酸化酪氨酸（pTyr）。在哺乳動(dòng)物中大約有三分之一的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是磷酸化修飾的，對(duì)眾多生物化學(xué)功能起開/關(guān)調(diào)控作用，是一種普遍的調(diào)控機(jī)制。磷酸化蛋白βcasein蛋白為sigma產(chǎn)品，純度90％。當(dāng)進(jìn)行手動(dòng)測(cè)序時(shí)，毛細(xì)管電壓為8001200V可得到穩(wěn)定的噴霧。標(biāo)記處為磷酸化絲氨酸。因此具體研究中還要根據(jù)具體要求優(yōu)化具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)。二、結(jié)果與討論中性丟失掃描：1μL 1μg/μL βcasein酶解混合物用50％乙腈／水溶液稀釋為100μL（約500fmol/μL）注射泵進(jìn)樣，正離子中性丟失掃描模式掃描中性丟失49的雙電荷離子（圖1）。鍍金屬鈀的硼硅酸鹽電噴霧針（palladiμmcoated borosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Denmark)是一次性使用的專用needle。我們用天然磷酸化蛋白建立了中性丟失掃描和固相金屬親和色譜（IMAC）兩種基于質(zhì)譜的磷酸化蛋白分析方法。應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)項(xiàng)目完成人員：王紅霞 李衛(wèi)華 李愛玲 劉炳玉項(xiàng)目完成單位：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院國(guó)家生物
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