應用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位-文庫吧資料
2025-04-10 23:21本頁面
【正文】 聯(lián)質(zhì)譜碎片校正，質(zhì)量準確度177。該質(zhì)譜圖經(jīng)Micromass的專用軟件MaxEnt3處理后，用Micromass的專用軟件MasSeq直接推倒出肽段序列。當進行手動測序時，毛細管電壓為8001200V可得到穩(wěn)定的噴霧。TOF 。源溫80176。鍍金屬鈀的硼硅酸鹽電噴霧針（palladiμmcoated borosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Denmark)是一次性使用的專用needle。2) 離子親和層析IMAC法富集磷酸化肽段：①％乙酸／50％乙腈／水溶液洗3次，②用200mM Ga(NO3)3溶液洗10次，③用超純水洗3次，④用1％乙酸／10％乙腈／水溶液洗3次， ⑤％乙酸／10％乙腈／水溶液洗5次，⑥蛋白質(zhì)酶解混合物用酸性溶液（20％乙酸或1％甲酸水溶液）調(diào)pH至2以下，用ZipTipMC吸取、排出10次以上，⑦％乙酸／10％乙腈／水溶液洗6次，⑧用超純水洗3次，⑨2－3μL ；3) 質(zhì)譜分析： 電噴霧質(zhì)譜儀為英國Micromass公司的電噴霧四極桿正交加速飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀QTOF2。2．方法1) 蛋白的溶液酶切：稱取標準磷酸化蛋白βcasein 50μg，溶于50μL 25mM NH4HCO3中。儀器：電噴霧四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀（QTof2，Micromass），配有masslynx數(shù)據(jù)系統(tǒng)。色譜純乙腈為美國Fisher Scientific 產(chǎn)品；a氰基4羥基肉桂酸(aCCA)為Bruker提供；三氟乙酸(TFA)為 Fluka公司產(chǎn)品。磷酸化蛋白βcas
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